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A verificação da normalidade a partir da assimetria e da curtose dos dados revelou que todas as variáveis apresentavam valores entre -1,00 e +1,00, portanto, apresentando normalidade.

Durante a coleta de dados, os alunos da Escola de Referência em Ensino Médio Otacílio Nunes de Souza não realizaram a terceira etapa da coleta, devido ao término do calendário escolar. Desta forma, a quantidade total de voluntários que preencheu o IPAQ, realizou o Cold Pressor Test, e tiveram amostras de saliva coletadas foi reduzida. Ainda, houve algumas desistências na coleta de sangue (n=11) e na avaliação antropométrica (n=4). A genotipagem do rs4646994 do gene da ECA foi feita apenas nos voluntários que realizaram o Cold Pressor Test e que tinham amostra de sangue coletada (n=160).

As características gerais da amostra estão exibidas na tabela 1. A distribuição dos genótipos dos polimorfismos dos genes FTO e ECA estão descritos na tabela 2. O teste do Qui-Quadrado revelou equilíbrio entre os genótipos para os dois genes (X²=0,49 e X²=3,21, respectivamente; p>0,05).

Tabela 1. Características gerais da amostra.

n Variável Média ± DP

216 Idade (anos) 16,27 ± 1,31

216 Escala de Tanner 4,21 ± 0,64

216 Massa corporal (kg) 64,25 ± 12,45

216 Estatura (cm) 173,43 ± 6,71

216 Índice de massa corporal (kg/m²) 21,28 ± 3,55

216 Escore-Z de IMC por Idade -0,64 ± 1,20

216 Circunferência da cintura (cm) 74,17 ± 7,60

216 Relação cintura-estatura 0,43 ± 0,04

216 Dobra cutânea triciptal (mm) 8,93 ± 3,35 215 Dobra cutânea da panturrilha (mm) 9,98 ± 4,01 215 Somatório de dobras cutâneas (mm) 18,92 ± 7,09 215 Percentual de gordura corporal (%) 14,93 ± 5,25 163 Pressão arterial sistólica (mmHg) 120,77 ± 12,86 163 Pressão arterial diastólica (mmHg) 69,61 ± 8,68 IMC=índice de massa corporal.

Tabela 2. Distribuição dos genótipos dos polimorfismos dos genes FTO e ECA. Gene FTO (n=209)

Genótipo Indivíduos Percentual

AA 29 13,9%

AT 104 49,8%

TT 76 36,4%

Gene ECA (n=160)

Genótipo Indivíduos Percentual

II 34 21,3%

ID 67 41,9%

DD 59 36,9%

As demais análises revelaram que 17,1% (n=37) dos adolescentes apresentaram excesso de peso (sobrepeso ou obesidade) de acordo com o IMC por idade. A relação cintura-estatura esteve elevada em 7,4% (n=16) da amostra, 15,3% (n=33) dos participantes possuíam mais de 20,0% de gordura corporal e apenas 0,9% (n=2) apresentaram a circunferência da cintura elevada para sua respectiva idade. No que se refere à pressão arterial, 16,0% (n=26) dos alunos apresentaram valores elevados em situação de repouso e 33,7% (n=55) mostraram-se hiper- reativos ao Cold Pressor Test.

A tabela 3 exibe as características gerais dos participantes divididos de acordo com os diferentes genótipos do rs9939609 do gene do FTO. Neste sentido, foi possível observar que os carreadores do genótipo AA apresentaram valores significativamente mais altos de circunferência da cintura, escore-z de IMC por idade e relação cintura-estatura quando comparados aos do genótipo TT. Além disso, variáveis como massa corporal e IMC apresentaram tendência à diferença entre os grupos mencionados (p=0,06 e p=0,079, respectivamente). Por outro lado, nenhuma diferença significativa foi observada quando esta análise foi realizada entre os diferentes genótipos do rs4646994 do gene da ECA (tabela 4).

Tabela 3. Características gerais da amostra de acordo com os diferentes genótipos do FTO. AA (n=29) AT (n=104) TT (n=76) Massa corporal (kg) 68,03 ± 10,13 65,53 ± 12,98 61,69 ± 11,74 Estatura (cm) 174,41 ± 7,16 173,69 ± 6,60 172,83 ± 6,48 IMC (kg/m²) 22,31 ± 2,77 21,64 ± 3,73 20,57 ± 3,34 Escore Z de IMC 0,38 ± 1,01* 0,03 ± 1,22 -0,29 ± 1,15 Circ. da cintura (cm) 77,15 ± 6,51* 74,45 ± 7,69 72,85 ± 7,36 RCE 0,44 ± 0,04* 0,42 ± 0,04 0,42 ± 0,04 DC triciptal (mm) 9,56 ± 3,46 9,03 ± 3,40 8,45 ± 3,14 DC da panturrilha (mm) 11,00 ± 4,69 10,13 ± 3,88 9,34 ± 4,02 Σ de DC (mm) 20,56 ± 7,71 19,15 ± 7,03 17,81 ± 6,95 % de gordura (%) 16,14 ± 5,72 15,11 ± 5,21 14,10 ± 5,12 IMC=índice de massa corporal; Circ. da cintura=circunferência da cintura; RCE=relação cintura- estatura; DC=dobra cutânea; Σ de DC=somatório das dobras cutâneas triciptal e panturrilha; % de gordura=percentural de gordura corporal; *p≤0,05 em relação ao grupo TT.

Tabela 4. Características gerais da amostra de acordo com os diferentes genótipos da ECA. II (n=34) ID (n=67) DD (n=59) Massa corporal (kg) 68,68 ± 13,56 63,78 ± 12,26 64,68 ± 12,41 Estatura (cm) 173,14 ± 6,34 172,09 ± 6,94 173,46 ± 6,04 IMC (kg/m²) 22,86 ± 4,03 21,40 ± 3,25 21,44 ± 3,70 Escore Z de IMC 0,47 ± 1,18 0,07 ± 1,03 -0,05 ± 1,25 Circ. da cintura (cm) 76,73 ± 8,51 73,69 ± 6,98 74,30 ± 7,99 RCE 0,44 ± 0,05 0,43 ± 0,04 0,43 ± 0,04 DC triciptal (mm) 9,82 ± 3,73 8,63 ± 3,03 8,90 ± 3,49 DC da panturrilha (mm) 11,44 ± 4,59 9,50 ± 3,46 10,29 ± 4,56 Σ de DC (mm) 21,26 ± 8,06 18,15 ± 6,23 19,17 ± 7,76 % de gordura (%) 16,63 ± 5,90 14,38 ± 4,66 15,12 ± 5,74 IMC=índice de massa corporal; Circ. da cintura=circunferência da cintura; RCE=relação cintura- estatura; DC=dobra cutânea; Σ de DC=somatório das dobras cutâneas triciptal e panturrilha; % de gordura=percentural de gordura corporal.

A análise de razão de chance (odds ratio) revelou que os portadores do alelo “A” do rs9939609 do gene FTO apresentam 1,83 vezes mais chances de possuírem um escore-z de IMC por idade elevado quando comparados aos indivíduos homozigotos para o alelo “T”. Estas chances mostraram-se 1,48 vezes mais altas no que se refere à relação cintura-estatura e 1,47 vezes maiores em relação ao percentual de gordura. Nenhuma destas análises apresentou significância estatística (X²=2,15 para escore-z de IMC por idade, X²=0,42 para RCE e X²=0,83 para percentual de gordura; p>0,05), conforme tabela 5.

Tabela 5. Razão de chance (odds ratio) entre o escore-Z de IMC por idade elevado, relação cintura-estatura elevada e percentual de gordura elevado e a presença alelo “A” e homozigotos para o alelo “T” do rs9939609 do gene FTO.

n Escore-Z de IMC por idade elevado

Odds Ratio IC (90%)

75 TT 1 -

130 AA/AT 1,83 0,923 – 3,643

Relação cintura-estatura elevada Odds Ratio IC (90%)

75 TT 1 -

130 AA/AT 1,48 0,542 – 4,036

Percentual de gordura elevado Odds Ratio IC (90%)

74 TT 1 -

130 AA/AT 1,47 0,730 – 2,963

Dos voluntários com pressão arterial de repouso normal, 32,1% (n=44) foram considerados hiper-reativos no Cold Pressor Test. Já nos participantes com pressão arterial de repouso elevada, 42,3% (n=11) apresentaram variações acima de 25 mmHg ou 20 mmHg para a pressão arterial sistólica e diastólica, respectivamente.

Com relação à aplicação do Cold Pressor Test nos indivíduos que realizaram o teste (n=163), houve um incremento significativo da pressão arterial sistólica e durante o teste quando comparada à pressão arterial de repouso. Ainda, a pressão arterial diastólica se manteve elevada em relação ao repouso um minuto após a realização do mesmo (Tabela 6).

Tabela 6. Comportamento da pressão arterial em repouso, durante e 1 minuto após a realização do Cold Pressor Test.

n=163 Repouso Durante 1 min Após

PAS (mmHg) 120,77 ± 12,86 134,09 ± 19,94*† 122,94 ± 16,24 PAD (mmHg) 69,61 ± 8,68 83,63 ± 13,52*† 72,27 ± 10,50* PAS=pressão arterial sistólica; PAD=pressão arterial diastólica; *p≤0,05 em relação ao Repouso; †p≤0,05 em relação a 1 min Após.

A Análise de Covariância (ANCOVA) do comportamento da pressão arterial em repouso, durante e 1 minuto após a realização do Cold Pressor Test foi realizada de acordo com os diferentes genótipos do gene FTO e ECA (n=153), utilizando a idade, o estágio de maturação e o escore-z de IMC por idade como covariantes. Este procedimento permitiu verificar se a pressão arterial também sofreria influências dos diferentes genótipos, assim como ocorrido nas variáveis antropométricas. Todavia, não foram observadas alterações significativas (tabelas 7 e 8).

Tabela 7. Resposta da pressão arterial em repouso, durante e 1 minuto após a realização do Cold Pressor Test de acordo com os diferentes genótipos do FTO.

Repouso Durante 1 min Após

PAS (mmHg) AA (n=17) 117,24 ± 2,61 133,55 ± 4,73 123,52 ± 3,61 AT (n=78) 120,72 ± 1,21 134,26 ± 2,20 123,74 ± 1,67 TT (n=58) 121,72 ± 1,42 135,22 ± 2,56 122,63 ± 1,95 PAD (mmHg) AA (n=17) 68,97 ± 1,87 85,50 ± 3,30 74,50 ± 2,38 AT (n=78) 68,91 ± 0,87 83,04 ± 1,53 72,06 ± 1,10 TT (n=58) 70,74 ± 1,01 84,36 ± 1,79 71,91 ± 1,29 PAS=pressão arterial sistólica; PAD=pressão arterial diastólica.

Tabela 8. Resposta da pressão arterial em repouso, imediatamente após e 1 minuto após a realização do Cold Pressor Test de acordo com os diferentes genótipos da ECA.

Repouso Durante 1 min Após

PAS (mmHg) II (n=32) 116,60 ± 1,90 131,30 ± 3,47 121,91 ± 2,65 ID (n=65) 121,97 ± 1,31 135,74 ± 2,40 123,25 ± 1,83 DD (n=56) 121,60 ± 1,42 135,01 ± 2,59 124,13 ± 1,98 PAD (mmHg) II (n=32) 68,15 ± 1,38 82,41 ± 2,43 72,95 ± 1,75 ID (n=65) 69,25 ± 0,95 83,64 ± 1,68 71,58 ± 1,21 DD (n=56) 70,85 ± 1,03 84,83 ± 1,81 72,70 ± 1,31 PAS=pressão arterial sistólica; PAD=pressão arterial diastólica.

A análise da razão de chance entre os portadores do alelo “I” e os homozigotos do alelo “D”, por sua vez, revelou a presença do alelo “I” aumentou em 50% as chances de o indivíduo apresentar uma pressão arterial de repouso elevada. Por outro lado, a presença deste mesmo alelo reduziu em 5,0% as chances de os indivíduos serem hiper-reativos ao Cold Pressor Test. Tais resultados não apresentaram diferenças significativas (X²=0,49 e X²=0,02, respectivamente; p>0,05) como exibido na tabela 9.

Tabela 9. Razão de chance (odds ratio) entre a pressão arterial de repouso elevada e a hiper-reatividade no Cold Pressor Test e a presença alelo “I” e homozigotos para o alelo “D” do gene da ECA.

n Pressão arterial de repouso elevada

Odds Ratio IC (90%) 34 II 1 - 126 DD/ID 1,50 0,574 – 3,917 Hiper-reatividade no CPT Odds Ratio IC (90%) 34 II 1 - 126 DD/ID 0,95 0,488 – 1,849

A resposta da pressão arterial ao Cold Pressor Test foi, em seguida, avaliada considerando a classificação dos voluntários em relação ao IMC e o percentual de gordura. Neste sentido, os resultados revelaram que os indivíduos com IMC elevado para a idade apresentaram valores de pressão arterial sistólica e diastólica significativamente mais altos do que os seus pares eutróficos em repouso, durante e 1 minuto após a realização do teste (Tabela 10).

Em relação ao percentual de gordura, os participantes com excesso de adiposidade apresentaram pressão arterial sistólica mais elevada em repouso e durante o Cold Pressor Test. A pressão arterial diastólica, por sua vez, permaneceu com valores mais altos 1 minuto após o teste quando comparado aos voluntários com níveis normais de gordura corporal (Tabela 11).

Tabela 10. Resposta da pressão arterial em repouso, durante e 1 minuto após a realização do Cold Pressor Test de acordo com a classificação de IMC por idade.

Pressão Arterial Sistólica (mmHg)

IMC por idade Repouso Durante 1 min Após

Normal (n=129) 118,53 ± 11,88 130,54 ± 17,94 119,58 ± 14,13 Elevado (n=34) 129,26 ± 13,04* 147,56 ± 21,61* 135,70 ± 17,55*

Pressão Arterial Diastólica (mmHg)

IMC por idade Repouso Durante 1 min Após

Normal (n=129) 68,67 ± 8,73 82,26 ± 12,92 70,69 ± 9,90 Elevado (n=34) 73,18 ± 7,63* 88,88 ± 14,62* 78,26 ± 10,70* *p≤0,05 em relação ao normal no mesmo momento.

Tabela 11. Resposta da pressão arterial em repouso, durante e 1 minuto após a realização do Cold Pressor Test de acordo com a classificação de percentual de gordura corporal.

Pressão Arterial Sistólica (mmHg)

% de gordura Repouso Durante 1 min Após

Normal (n=134) 119,74 ± 12,25 132,51 ± 19,30 122,04 ± 15,72 Elevado (n=28) 126,11 ± 14,57* 142,18 ± 21,48* 128,10 ± 17,66

Pressão Arterial Diastólica (mmHg)

% de gordura Repouso Durante 1 min Após

Normal (n=134) 69,19 ± 8,61 83,07 ± 13,32 71,49 ± 10,66 Elevado (n=28) 71,89 ± 8,91 86,96 ± 14,04 76,46 ± 8,57* *p≤0,05 em relação ao normal no mesmo momento.

Como os valores de repouso da pressão arterial sistólica foram significantemente diferentes entres os participantes com IMC para idade e percentual de gordura elevados, em comparação aos seus pares normais, foi realizada a análise do delta de variação para verificar se houve aumento significativo entre os diferentes momentos do Cold Pressor Test e a classificação dos voluntários para estas variáveis.

Os resultados indicaram que os indivíduos com IMC elevado para a idade permaneceram com a pressão arterial sistólica e diastólica mais altas um minuto após o teste em relação aos seus pares normais. Ainda, a pressão arterial sistólica medida durante o teste foi significativamente superior nos voluntários com IMC elevado (p=0,05) (figuras 2A e 2B).

No que se refere ao percentual de gordura corporal, a análise do delta de variação entre os adolescentes com adiposidade elevada e normal não revelou diferenças significativas nos diferentes momentos do Cold Pressor Test (Figuras 3A e 3B).

Figura 2. Delta de variação da pressão arterial sistólica (A) e diastólica (B) antes, durante e um minuto após o Cold Pressor Test em relação ao repouso, de acordo com a classificação do IMC por idade. *p<0,05 quando comparado ao normal no mesmo momento.

Figura 3. Delta de variação da pressão arterial sistólica (A) e diastólica (B) antes, durante e um minuto após o Cold Pressor Test em relação ao repouso, de acordo com a classificação do percentual de gordura.

A análise da razão de chance (odds ratio) revelou que os indivíduos com IMC elevado apresentaram 180% mais chances de serem hiper-reativos ao estresse cardiovascular induzido quando comparados aos seus pares eutróficos, resultado que alcançou significância estatística (X²=7,08; p<0,05). Os adolescentes que possuíam o percentual de gordura elevado, por sua vez, apresentaram 59,0% mais chances de serem hiper-reativos ao estresse cardiovascular induzido. Contudo, esse resultado não apresentou significância estatística (X²=1,20; p=0,27), conforme tabela 12.

Tabela 12. Razão de chance (odds ratio) entre o diagnóstico de escore-Z de IMC por idade e percentual de gordura e a hiper-reatividade ao estresse cardiovascular induzido. n Hiper-reatividade ao estresse Odds Ratio IC (90%) 129 IMC normal 1 - 34 IMC elevado 2,80* 1,461 – 5,356 134 %G normal 1 - 28 %G elevado 1,59 0,790 – 3,190

IMC=índice de massa corporal; %G=percentual de gordura. *p<0,05 em relação ao IMC normal.

Dos 153 voluntários que responderam o questionário relacionado ao nível de atividade física (IPAQ), 43,1% (n=66) foram considerados muito ativos; 37,9% (n=58) ativos; 16,3% (n=25) parcialmente ativos; e apenas 2,6% (n=4) sedentários.

Para efeitos de análise, as categorias “muito ativo” e “ativo” foram agrupadas em uma nova categoria denominada “ativo”, enquanto que as categorias “parcialmente ativo” e “sedentário” formaram uma nova categoria denominada “sedentário”. A tabela 13 exibe as características gerais dos voluntários. Não foram observadas diferenças significativas entre os dois grupos.

O comportamento da pressão arterial, por meio do Cold Pressor Test, não revelou diferenças significativas entre os indivíduos fisicamente ativos e sedentários (tabela 14).

Tabela 13. Características gerais dos voluntários a partir da classificação do nível de atividade física.

Baixo (n=14) Moderado (n=58) Alto (n=91) Massa Corporal (kg) 66,17 ± 12,59 63,16 ± 11,64 66,53 ± 13,59 Estatura (cm) 173,21 ± 5,82 172,60 ± 6,47 172,70 ± 6,88 IMC (kg/m²) 21,70 ± 5,82 21,14 ± 3,46 22,18 ± 3,74 Z-IMC por idade 0,13 ± 1,22 -0,07 ± 1,17 0,25 ± 1,13 Circ. da cintura (cm) 75,53 ± 10,50 73,79 ± 7,67 75,18 ± 7,58 RCE 0,43 ± 0,06 0,43 ± 0,04 0,43 ± 0,04 DC triciptal (mm) 10,07 ± 4,56 8,98 ± 3,24 9,00 ± 3,41 DC panturrilha (mm) 11,86 ± 5,29 10,45 ± 4,39 9,92 ± 3,84 Σ de DC (mm) 21,93 ± 9,70 19,43 ± 7,30 18,93 ± 6,97 % de gordura (%) 17,11 ± 7,10 15,28 ± 5,34 14,96 ± 5,21 PAS repouso (mmHg) 121,50 ± 12,33 119,91 ± 13,95 121,31 ± 12,31 PAD repouso (mmHg) 70,64 ± 8,20 69,81 ± 9,17 69,32 ± 8,52

IMC=índice de massa corporal; Circ. da cintura=circunferência da cintura; RCE=razão cintura- estatura; DC=dobra cutânea; Σ de DC=somatório das dobras cutâneas triciptal e panturrilha; PAS=pressão arterial sistólica; PAD=pressão arterial diastólica.

Tabela 14. Resposta da pressão arterial em repouso, durante e 1 minuto após a realização do Cold Pressor Test de acordo com a classificação do nível de atividade física.

Pressão Arterial Sistólica (mmHg)

Repouso Durante 1 min Após

Baixo (n=13) 119,91 ± 3,05 131,68 ± 5,36 120,12 ± 4,07 Moderado (n=57) 121,81 ± 1,47 135,57 ± 2,59 124,35 ± 1,97 Alto (n=86) 119,92 ± 1,19 134,06 ± 2,09 122,97 ± 1,59

Pressão Arterial Diastólica (mmHg)

Repouso Durante 1 min Após

Baixo (n=13) 69,04 ± 2,12 85,77 ± 3,75 71,97 ± 2,65 Moderado (n=57) 70,96 ± 1,02 85,42 ± 1,81 74,48 ± 1,28 Alto (n=86) 68,73 ± 0,83 82,17 ± 1,46 70,78 ± 1,04

Os valores de nitrito salivar, e as taxas de liberação de saliva e secreção de nitrito na saliva, antes e após 1 minuto da aplicação do Cold Pressor Test, foram medidos com o intuito de verificar diferenças entre os dois momentos. Neste sentido, foram observadas diferenças significativas entre o nitrito salivar e a taxa de secreção de nitrito na saliva, que apresentaram valores pré Cold Pressor Test mais elevados em relação aos medidos 1 minuto após o teste (tabela 15).

Por fim, foram realizadas comparações entre os diferentes genótipos do gene da ECA e do FTO e o nitrito salivar e a taxa de secreção de nitrito na saliva antes e 1 minuto após a aplicação do Cold Pressor Test. Os resultados não apontaram diferenças estatísticas entre os genótipos, conforme tabelas 16 e 17.

Tabela 15. Valores de nitrito salivar, taxa de liberação de saliva e taxa de secreção de nitrito na saliva antes e 1 minuto após o Cold Pressor Test. Valores expressos em média ± erro padrão (exceto taxa de liberação de saliva, expresso em média ± desvio padrão).

Antes 1 min após

Nitrito salivar (μM) 108,14 ± 4,76* 83,39 ± 3,08

Taxa de liberação de

saliva (mL/min) 0,61 ± 0,29 0,59 ± 0,31

Taxa de secreção de

Tabela 16. Valores de nitrito salivar e taxa de secreção de nitrito na saliva antes e 1 minuto após o Cold Pressor Test de acordo com os diferentes genótipos do gene da ECA. Dados expressos em média ± erro padrão.

Nitrito (μM)

Antes 1 min após

II (n=34) 108,24 ± 9,84* 87,81 ± 6,33 ID (n=67) 106,58 ± 7,55* 83,39 ± 4,74 DD (n=59) 106,31 ± 7,78* 79,08 ± 5,25

Taxa de secreção de nitrito na saliva (U/min)

Antes 1 min após

II (n=34) 65,71 ± 8,54* 47,04 ± 5,57

ID (n=67) 56,79 ± 4,25* 47,29 ± 2,95

DD (n=59) 58,53 ± 4,19* 41,67 ± 3,59

*p<0,05 para 1 min após dentro do mesmo genótipo.

Tabela 17. Valores de nitrito salivar e taxa de secreção de nitrito na saliva antes e 1 minuto após o Cold Pressor Test de acordo com os diferentes genótipos do gene FTO. Dados expressos em média ± erro padrão.

Nitrito (μM)

Antes 1 min após

AA (n=18) 122,25 ± 17,86* 94,63 ± 10,11 AT (n=81) 104,11 ± 59,91* 81,52 ± 4,44 TT (n=61) 105,93 ± 54,59* 80,86 ± 4,63

Taxa de secreção de nitrito na saliva (U/min)

Antes 1 min após

AA (n=18) 75,18 ± 10,99 58,59 ± 8,97

AT (n=81) 56,91 ± 3,69* 43,27 ± 2,84

TT (n=61) 57,86 ± 5,05* 43,73 ± 3,23