1
Fernanda Teixeira Benevides, 1Francisca Leidiane Santos Leandro, 2Larisse Mota Marques, 2Nylane Maria Nunes de Alencar, 2Karoline Sabóia Aragão.
1
Faculdade Estácio do Ceará- FIC. Fortaleza-CE e 2Universidade Federal do Ceará – UFC. Email: [email protected]. Endereço: Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências da Saúde, Departamento de Fisiologia e Farmacologia. Rua Cel. Nunes de Melo, 1127. CEP: 60430270. Fortaleza-Ceará
Resumo
Cistite hemorrágica (CH) é um efeito adverso decorrente do uso de ciclofosfamida (CFS). Uncaria tomentosa tem apresentado atividades antiinflamatórias. OBJETIVO: Investigar o efeito do extrato aquoso de Uncaria tomentosa (UT) no modelo experimental de CH induzida por CFS. METODOLOGIA: Para indução da CH, camundongos Swiss fêmeas receberam 400mg/kg de CFS i.p. 12h antes do sacrifício. O grupo tratado com UT recebeu o extrato aquoso 2% ad libitum durante 9 dias, e no décimo dia 200mg/kg v.o. de UT 1h antes, 3, 6 e 9h após a administração de CFS. O grupo controle experimental recebeu apenas o veículo aquoso, v.o. Após o sacrifício, as bexigas dos animais foram pesadas para determinação do seu peso úmido vesical (PUV) e avaliadas macroscopicamente segundo os critérios de Gray para edema. RESULTADOS: UT foi capaz de reduzir significativamente (p<0,05) o aumento do PUV em 30,5% e as alterações macroscópicas avaliadas de acordo os critérios de Gray (edema: de 1 [1-2] para 0 [0-1]) quando comparado ao grupo tratado somente com CFS. CONCLUSÃO: Esses achados demonstram a atividade antiinflamatória do extrato aquoso de Uncaria tomentosa no modelo de cistite hemorrágica induzida por ciclofosfamida. Novas abordagens estão sendo tomadas para elucidar os possíveis mecanismos de ação envolvidos.
Palavras-chave: CISTITE HEMORRÁGICA; Uncaria tomentosa; CICLOFOSFAMIDA. 1. Introdução
Apesar do fato da quimioterapia continuar a ser a opção de melhores resultados para o tratamento de muitos tipos de neoplasias, há uma constante pesquisa em busca do desenvolvimento de novas drogas com eficácia e especificidade maiores, bem como com efeitos adversos reduzidos.
As oxazafosforinas, ciclofosfamida (CFS) e ifosfamida (IFO), figuram entre as drogas citotóxicas mais utilizadas, sendo ativas contra muitos tipos de doenças neoplásicas e benignas (1). A ciclofosfamida é a oxazafosforina mais utilizada na prática oncológica. Produz resposta clínica em tumores de mama, ovário, linfomas, sendo também frequentemente utilizada em regimes de condicionamento para transplantes de medula óssea.
Cistite hemorrágica (CH) é o principal efeito adverso dose-limitante das oxazafosforinas. A incidência deste efeito colateral no curso da terapia prolongada com CFS, em baixas doses, varia de 2 a 40% e pode ser tão elevada quanto 75% em pacientes em uso de altas doses intravenosas de CFS (3).
A cistite hemorrágica trata-se de um processo inflamatório de intensidade variável causado pela eliminação renal de metabólitos tóxicos da ciclofosfamida e da ifosfamida. Dentre os metabólitos tóxicos das oxazafosforinas, destaca-se a acroleína como principal responsável pelo dano urotelial (2). Neste sentido, tem sido proposto que o dano urotelial é provocado pelo contato direto da acroleína com o epitélio vesical, causando edema, ulceração, hemorragia, necrose e neovascularização.
O extrato de Uncaria tomentosa apresentou uma eficiente atividade antiinflamatória nos modelos de edema de pata induzidos por carragenina (4). De maneira indiscriminada a população em geral vem utilizando o chá da Uncaria tomentosa no tratamento de diversos sintomas relacionados à inflamação. Estudos relacionados a diferentes doses de administração do chá de UT fazem-se necessários com o objetivo de avaliar se essas doses administradas pela população são realmente capazes de reduzir os efeitos do processo inflamatório, e se o consumo excessivo pode acarretar efeitos indesejáveis. Baseado nas propriedades biológicas do extrato de Uncaria tomentosa, principalmente relacionados a processos inflamatórios (5). O presente estudo tem como objetivo principal investigar o efeito do chá da Uncaria tomentosa (unha de gato) sobre os eventos inflamatórios no modelo de cistite hemorrágica induzida por ciclofosfamida, sendo capaz de reduzir o peso úmido vesical (PUV) e o edema macroscópico nas bexigas.
2. Metodologia
2.1 Coleta da planta Uncaria tomentosa
A amostra da casca de Uncaria tomentosa foi adquirida em lojas de produtos naturais estabelecidas na cidade de Fortaleza-Ce/Brasil. O processo de extração do princípio ativo da planta Uncaria tomentosa foi realizado por decocção a 2% (20g/L), durante 30 minutos.
2.2 Animais
Foram utilizados camundongos Swiss albinos (Mus musculus) fêmeas, pesando entre 20 e 30 gramas, provenientes do Biotério da Faculdade Estácio do Ceará (FIC). Os experimentos foram conduzidos de acordo com as normas estabelecidas pela comissão de ética com animais de experimentação, com aprovação do Comitê de Ética para o Uso de Animais da Universidade Estadual do Ceará, registrado sob o número 10724196-0/04. 2.3 Indução da cistite hemorrágica por Ciclofosfamida
Camundongos Swiss fêmeas (20-30 g) receberam Ciclofosfamida (Genuxal -Asta Médica, Brasil) 400mg/kg, via intraperitoneal (i.p.). Os animais foram tratados durante dez dias. Foram administrados aos animais durante nove dias o extrato aquoso de Uncaria tomentosa 2% ad libitum em vez de água e no décimo dia o extrato de Uncaria tomentosa foi administrado na dose de 200mg/Kg (10mL/Kg) por gavagem (v.o.) 1 hora antes e 3, 6 e 9 horas após a administração da CFS. Após 12 h da administração da CFS, os animais foram sacrificados por deslocamento cervical e através de uma incisão abdominal mediana foi realizada uma cuidadosa dissecção vesical para retirada das bexigas junto ao colo vesical. As bexigas foram seccionadas e seus conteúdos desprezados. Foram colocadas em contato com papel absorvente para retirada do excesso de líquidos. Em seguida, foram pesadas e o resultado do peso úmido vesical (PUV) foi expresso como Média ± EPM de mg de bexiga/20g de peso corporal, visando à correção da variação das massas corpóreas dos animais.
Os grupos controles experimentais tiveram água ad libitum durante os 9 dias do experimento e no décimo dia, a água foi administrada por gavagem (10 mL/Kg) nos mesmos horários do grupo em tratamento com Uncaria tomentosa.
2.4 Quantificação da cistite a) Edema vesical
A determinação do edema foi realizada através da determinação do peso úmido vesical, expresso em mg/20 g de peso corporal.
b) Análise macroscópica
As bexigas foram examinadas à inspeção visual, quanto à presença de edema. Edema foi avaliado de acordo com os critérios de Gray (6) que se seguem: Severo (3+), quando fluido é visto externa e internamente na parede da bexiga; Moderado (2+), quando
o edema é confinado à mucosa interna; Intermediário (1+), aspecto entre normal e moderado; e Ausente (0), aspecto normal;
c) Análise Estatística
Os resultados da variação do Peso Úmido Vesical foram expressos como média ± Erro Padrão da Média (EPM). Para a verificação das diferenças estatísticas entre os grupos, foi realizada Análise de Variância (ANOVA) e teste de Bonferroni.
Os dados não paramétricos resultantes da análise macroscópica foram reportados como medianas, sendo aplicados os testes estatísticos de Kruskal-Wallis. Para todas as análises foi considerado significativo p < 0,05.
3. Resultados e discussão
A figura 1 mostra o efeito do extrato de Uncaria tomentosa sobre o edema vesical, avaliado a partir da quantificação do Peso Úmido Vesical (PUV). A injeção intraperitoneal de ciclofosfamida (400 mg/kg, i.p.) induziu um aumento significativo no peso úmido vesical 12 horas após a sua administração (33,18 ± 3,087 g/20g, um aumento de 130,1%, p < 0,05) quando comparado ao grupo controle (14,42 ± 0,325 g/20g).
O tratamento com extrato aquoso de Uncaria tomentosa preveniu significativamente o aumento no peso úmido vesical causado por ciclofosfamida em torno de 30,5% (23,06 ± 1,547, p < 0,05). A tabela 1 apresenta a análise macroscópica das bexigas avaliada segundo os critérios de Gray para edema. Bexigas de animais tratados somente com CFS desenvolveram significante edema (mediana = 1, p < 0,05) quando comparado com o grupo controle (mediana = 0). UT protegeu significativamente do edema induzido por ciclofosfamida (mediana = 0, p < 0,05).
Os resultados do presente estudo apontam para um possível efeito no sentido de reduzir o edema produzido pela cistite hemorrágica induzida por ciclofosfamida. Esse efeito foi estudado através da medição do peso úmido vesical e da avaliação macroscópica das bexigas. O peso úmido vesical (PUV) mede o peso da bexiga em relação a 20g do peso do camundongo. Quanto maior o PUV, maior o edema produzido. No nosso estudo, observamos a redução significativa do PUV dos animais tratados com o extrato aquoso de Uncaria tomentosa (UT) em relação aos animais que não receberam tratamento com UT.
Os critérios de Gray classificam os diferentes graus de edema pela atribuição de escores através da análise macroscópica. Os resultados obtidos da análise macroscópica do edema corroboraram com a suposição de que o extrato aquoso de Uncaria tomentosa é capaz de reduzir o edema produzido pela indução de cistite hemorrágica em camundongos. 4. Conclusão
O extrato aquoso de Uncaria tomentosa apresentou um eficiente efeito antiinflamatório sobre os eventos inflamatórios no modelo de cistite hemorragia induzida por ciclofosfamida. O extrato aquoso de UT foi capaz de reduzir o peso úmido vesical das bexigas e, na avaliação macroscópica, foi observada significativa redução do edema. Novas abordagens estão sendo tomadas para elucidar os possíveis mecanismos de ação envolvidos.
Figura 1 – Peso Úmido Vesical (PUV) das bexigas de camundongos tratados com ciclofosfamida (CFS) e/ou extrato aquoso de Uncaria tomentosa 2% (20g/L) (UT). Os resultados da variação do PUV foram expressos como média ± EPM. Para a verificação das diferenças estatísticas entre os grupos, foi realizada Análise de Variância (ANOVA) e teste de Bonferroni. Diferença significante (p < 0,05) do PUV comparado ao controle (*) e ao grupo CFS (#).
Tabela 1 – Alterações macroscópicas avaliadas segundo os critérios de Gray das bexigas de camundongos tratados com ciclofosfamida (CFS) e/ou extrato aquoso de Uncaria tomentosa 2% (20g/L) (UT). Os dados da avaliação macroscópica foram reportados como medianas, sendo aplicados os testes estatísticos de Kruskal-Wallis. Diferença significante (p < 0,05) comparado ao controle (*) e ao grupo CFS (#).
REFERENCIAS
1. HUNTER H.L.; HARRISON E.F. The anticancer spectrum of ifosfamide. SeminOncol. 1982 Dec; 9 (4 Suppl 1):96-100.
2. GIFONI, M. A. C. Envolvimento da Pentraxina3 (PTX3) na patogênese da cistite hemorrágica induzida por ifosfamida em camundongos. 2008. 130f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) – Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza. 2008.
3. AYHANCI, A.; YAMAN, S.; SAHINTURK, V.; UYAR, R.; BAYRAMOGLU, G.; SENTURK, H.; ALTUNER, Y.; APPAK, S.; GUNES, S. Protective Effect of Seleno- L-Methionine on Cyclophosphamide-Induced Urinary Bladder Toxicity in Rats.Biol Trace Elem Res (2010) 134:98–108
4. AQUINO, R.; DE FEO, V.; DE SIMONE, F.; PIZZA, C.; CIRINO, G. Plant metabolites: new compounds and anti-inflammatory activity of Uncariatomentosa. Journal of Natural Products, 54(2): 453-9, 1991.
5. GONÇALVES C, DINIS T, BATISTA MT. Antioxidant properties of proanthocyanidins of Uncariatomentosa bark decoction: a mechanism for anti- inflammatory activity. Phytochemistry. 2005 Jan; 66 (1):89-98.
6. GRAY KJ, ENGELMANN UH, JOHNSON EH, FISHMAN IJ. Evaluation of misoprostol cytoprotection of the bladder with cyclophosphamide Cytoxan) therapy. J Urol 1986; 136: 497-500.