5.4.5.1 Seletividade
Com o objetivo de avaliar possíveis interferências dos excipientes nas determinações dos teores de OXC, os espectros dos placebos foram traçados, individualmente em relação a cada formulação, sem adição de OXC.
A solução placebo foi preparada: pesaram-se, exatamente, cerca de 25 mg de pó para balão volumétrico de 50 mL e adicionaram-se 40 mL de metanol. Submeteu-se ao ultra-som por cinco minutos e completou-se o volume com o mesmo solvente. Homogeneizou-se e filtrou-se, desprezando os primeiros mililitros do filtrado. Transferiram-se 5,00 mL para balão volumétrico de 100 mL, completou-se o volume com o mesmo solvente e homogeneizou-se. Traçou-se o espectro de absorção no UV, na faixa λ 200 nm a 400 nm, utilizando metanol para ajuste do zero. As medidas de absorvância foram feitas no λ fixo 305 nm.
Os espectros de cada placebo foram sobrepostos ao espectro de OXC para comparação visual da interferência. Também, calculou-se o porcentual de interferência de cada placebo em relação à resposta de absorvância da solução padrão de trabalho de OXC.
5.4.5.2 Precisão
A precisão foi determinada em dois dias consecutivos, obtendo-se os valores de precisão intra-dia (repetitividade) e inter-dia.
5.4.5.2.1 Precisão intra-dia
A precisão intra-dia foi realizada por meio da análise de seis determinações a 100% da concentração de trabalho. As soluções foram preparadas pesando-se do pó do conteúdo de 10 cápsulas o equivalente a 50 mg de OXC, transferindo-os para balão volumétrico de 50 mL. Adicionaram-se 40 mL de metanol, agitou-se no ultra-som por 10 minutos e completou-se o volume com o mesmo solvente. Homogeneizou-se e filtrou-se, desprezando os primeiros mililitros do filtrado. Em seguida, transferiram-se 5,00 mL para balão volumétrico de 100 mL e completou-se o volume com metanol.
Os teores médios de OXC, os desvios padrão relativos (DPR) e os intervalos de confiança foram calculados para cada formulação (n = 6). Recomenda-se que o valor de DPR seja inferior a 2,00% (GREEN, 1996).
5.4.5.2.2 Precisão inter-dia
A precisão inter-dia foi determinada realizando-se o mesmo procedimento descrito para precisão intra-dia (conforme 5.4.5.2.1) para seis soluções a 100% da concentração de trabalho, em dois dias consecutivos. Calculou-se a média e o DPR referentes a cada formulação (n = 12).
5.4.5.3 Exatidão
A exatidão foi realizada pelo método do placebo contaminado, em que quantidades conhecidas do padrão são adicionadas a misturas dos componentes da formulação (mistura de excipientes) com o intuito de determinar a porcentagem de recuperação do padrão. A exatidão foi avaliada a partir de nove determinações contemplando os níveis de 80%, 100% e 120% da concentração de trabalho da solução amostra das cápsulas (50,0 µg/mL), em triplicata para cada nível de concentração (Tabela 13).
Tabela 13 - Esquema de diluições para avaliar a exatidão do método para doseamento de OXC
cápsulas manipuladas por espectrofotometria no UV.
Nível de concentração Quantidade de placebo (mg) Quantidade de OXC (mg) Concentração de OXC (µg/L) 80% 50 80 40 100% 50 100 50 120% 50 120 60
A recuperação foi expressa pela relação entre a concentração média determinada experimentalmente e a concentração teórica correspondente, utilizando-se a equação:
% Recuperação = Concentração média experimental x 100 Concentração teórica
Segundo Green (1996), como critério de aceitação para a média de recuperação, em um método analítico de doseamento, deve ser de 100 ± 2%, ou seja, a recuperação deve estar compreendida na faixa 98% a 102% em cada nível. Realizou-se o teste t de Student para verificar se existe ou não diferença significativa entre o teor médio e o valor de recuperação de 100% (ASOCIACIÓN..., 2001).
5.4.6 Doseamento realizado em diferentes partes da encapsuladeira
O doseamento foi realizado utilizando-se o pó das vinte cápsulas provenientes das cinco partes da encapsuladeira (superior direita e esquerda, inferior direita e esquerda e centro) decorrentes do teste de determinação de peso (conforme 5.4.3).
Pesou-se, do pó das cápsulas, o equivalente a 100 mg de OXC para balão volumétrico de 100 mL e adicionaram-se 80 mL de metanol. Submeteu-se ao ultra- som por 10 minutos e completou-se o volume com o mesmo solvente. Homogeneizou-se e filtrou-se, desprezando os primeiros mililitros do filtrado. Transferiram-se 5,00 mL para balão volumétrico de 100 mL, completou-se o volume com o mesmo solvente e homogeneizou-se.
Empregou-se o método por espectrofotometria de absorção na região UV validado para a determinação do teor. Calculou-se a média e o DPR referentes a cada formulação (n = 5).
5.4.7 Uniformidade de doses unitárias por uniformidade de conteúdo
A uniformidade de doses unitárias de formas farmacêuticas foi determinada pelo método de uniformidade de conteúdo. De acordo com a Farmacopéia Brasileira, 4ª edição (1996), as cápsulas gelatinosas duras podem ser analisadas tanto por variação de peso quanto por uniformidade de conteúdo, dependendo da dose do fármaco presente na forma farmacêutica ou proporção do fármaco em relação à massa total da forma farmacêutica. As cápsulas das formulações propostas poderiam ter sido analisadas pelo método de variação de peso uma vez que possuem quantidade de fármaco maior que 50 mg. Entretanto, optou-se pelo método de uniformidade de conteúdo, uma vez que, esse método permite a determinação real do teor individual de 10 unidades testadas.
5.4.7.1 Procedimento para uniformidade de conteúdo
Transferiu-se todo o conteúdo de cada cápsula para cada balão volumétrico de 100 mL e adicionaram-se 80 mL de metanol. Submeteu-se ao ultra-som por 10 minutos e completou-se o volume com o mesmo solvente. Homogeneizou-se e filtrou-se, desprezando os primeiros mililitros do filtrado. Transferiram-se 2,00 mL para balão volumétrico de 50 mL, completou-se o volume com o mesmo solvente e homogeneizou-se.
O procedimento acima foi repetido para dez unidades de cápsulas. Prepararam-se Soluções padrão de trabalho de OXC a 60,0 µg/mL. Pesaram-se, exatamente, cerca de 60 mg de OXC para balão volumétrico de 100 mL e adicionaram-se 80 mL de metanol. Submeteu-se ao ultra-som por cinco minutos e completou-se o volume com o mesmo solvente. Transferiram-se 5,00 mL para balão volumétrico de 50 mL, completou-se o volume com o mesmo solvente e homogeneizou-se.
Empregou-se o método por espectrofotometria de absorção na região UV validado para a determinação do teor