de animais tratados não curados (TNC) revelou alteração na distribuição tecidual do kDNA de ambos os clones: o Bug2148 cl1 foi detectado na bexiga e no cérebro dos animais com infecção mista, ao contrário do observado nos animais com infecção monoclonal e o clone MAS cl1, inicialmente detectado no músculo esquelético, bexiga,
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cérebro e cólon de animais com infecção monoclonal, não estava presente nos animais com infecção mista (Tabela VII e Tabela VIII).
A Tabela IX representa o resultado obtido na caracterização dos clones presentes nos tecidos de animais com infecção mista não tratados (INT) e tratados (TNC) por LSSP-PCR e dos clones presentes no sangue e tecidos e caracterizados por isoenzimas e microssatélites (Martins et al., 2007; Martins, 2008).
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Tabela IX: Identificação de clones do Trypanosoma cruzi em tecidos por LSSP-PCR e no sangue e tecidos por isoenzimas* e microssatélites*
de camundongos BALB/c infectados com diferentes misturas pertencentes aos genótipos principais que apresentaram alteração no perfil de susceptibilidade ao benzonidazol e nas três misturas em que houve predominância do clone mais susceptível ao benzonidazol**.
Em negrito são representados os genótipos e clones do Trypanosoma cruzi resistentes ao Benzonidazol. Em vermelho genótipos e clones do Trypanosoma
cruzi parcialmente susceptíveis ao benzonidazol. Em letra normal: genótipos e clones do Trypanosoma cruzi susceptíveis ao benzonidazol. Sublinhado:
representa isolados em que houve a predominância após tratamento, do clone do T. cruzi mais susceptível ao benzonidazol baseado nas infecções monoclonais correspondentes. Indeterminado: representa isolados cujos perfis de LSSP-PCR ou microssatélites não foram compatíveis com o esperado baseado nos clones inoculados. (-) representa as misturas em que não foi possível fazer a caracterização dos clones por LSSP-PCR porque apresentaram a banda de 330pb fraca ou porque não foi possível caracterizar por microssatélites. *Resultados obtidos por Martins 2008. **Representa as três misturas em que houve predominância do clone mais susceptível ao benzonidazol.
Misturas de
genótipos Misturas clonais LSSP-PCR (tecido) Isoenzimas e microssatélites (sangue/tecido)
Animais INT Animais TNC Animais INT Animais TNC
Clone de T. cruzi Clone de T. cruzi Clone de T. cruzi Clone de T. cruzi
19+20 **Gamba cl1+ Cuica cl1 - - Cuica cl1 + Gamba cl1 Cuica cl1 + Gamba cl1
19+20 **OPS21 cl11 + P209 cl1 OPS21 cl11 + P209 cl1 OPS21 cl11 P209 cl1 + OPS21 cl11 OPS21 cl11
19+32 Gamba cl1 + IVV cl4 Gamba cl1 Gamba cl1 Gamba cl1 Gamba cl1 (2)
19+32 OPS21 cl11 + MAS cl1 OPS21 cl11 + MAS cl1 OPS21 cl11 Indeterminado Indeterminado
19+39 **Gamba cl1+ Bug2148 cl1 - - Gamba cl1 Gamba cl1 + Indeterminado
19+39 OPS21 cl11 + Bug2148 cl1 OPS21 cl11 OPS21 cl11 e Bug2148 cl1 OPS21 cl11 OPS21 cl11
19+39 Gamba cl1 + SO3 cl5 Gamba cl1 Gamba cl1 Gamba cl1 Gamba cl1
19+39 OPS21 cl11 + SO3 cl5 OPS21 cl11 + SO3 cl5 OPS21 cl11 - -
20+32 P209 cl1 + IVV cl4 P209 cl1 + IVV cl4 P209 cl1 P209 cl1 P209 cl1
20+39 P209 cl1 + SO3 cl5 P209 cl1 + SO3 cl5 P209 cl1 P209 cl1 P209 cl1 + Indeterminado
20+39 Cuica cl1 + SO3 cl5 Cuica cl1 + SO3 cl5 Cuica cl1 Cuica cl1 + Indeterminado Cuica cl1
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6.5) Identificação de clones de T. cruzi remanescentes nos tecidos de camundongos infectados com misturas dos genótipos principais e tratados com BZ considerados curados (TC) pelo critério de cura utilizado e que apresentaram PCR em tecido positiva
Resultados prévios obtidos por nosso grupo demonstraram que 12 animais considerados curados pelo critério de cura parasitológico e sorológico utilizado (ESF, He, PCR em eluato de sangue, ELISA e AATV) apresentaram PCR em tecido positiva (Martins et al., 2008). Em decorrência desses resultados, nesse trabalho foi feita também a identificação dos clones remanescentes nos tecidos desses animais empregando a técnica de LSSP-PCR a fim de verificar qual seria o clone responsável por essa positividade.
Um total de 46 tecidos positivos para o kDNA do T. cruzi de animais tratados e considerados curados (TC) foram avaliados pela técnica de LSSP-PCR e comparados com os tecidos de animais tratados não curados (TNC) e não tratados (INT). Oito amostras (11%) dos animais INT não puderam ser caracterizadas pela técnica de LSSP- PCR, pois apresentaram a banda de 330pb muito fraca (Tabela X).
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Tabela X: Identificação de clones de Trypanosoma cruzi provenientes de camundongos BALB/c com infecções mistas tratados com
benzonidazol e considerados curados (TC) pelo critério de cura e que apresentaram PCR em tecido positiva.
Em negrito estão os genótipos e clones do T. cruzi resistentes ao benzonidazol; em vermelho estão os genótipos e clones do T. cruzi parcialmente susceptíveis ao benzonidazol e em letra normal estão os genótipos e clones do T. cruzi susceptíveis ao benzonidazol. (-) representa combinações que não foi possível fazer a identificação do clone remanescente no tecido e em branco estão representados os tecidos cuja PCR para o kDNA do T. cruzi foi negativa. *Estão as misturas que também apresentaram alteração no perfil de susceptibilidade ao benzonidazol baseado na sua infecção monoclonal.
Misturas de Genótipos Misturas clonais Animais TC Tecidos
Coração Músculo Baço Bexiga Cérebro Cólon
19+32 *OPS21 cl11 + MAS cl1 OPS21 cl11 OPS21 cl11 OPS21 cl11
19+32 Gamba cl1 + MAS cl1 Gamba cl1 Gamba cl1 Gamba cl1 Gamba cl1 Gamba cl1
19+32 OPS21 cl11 + IVV cl4 OPS21 cl11 OPS21 cl11 OPS21 cl11 OPS21 cl11 OPS21cl11 OPS21 cl11
19+39 *OPS21 cl11 + SO3 cl5 OPS21 cl11 OPS21 cl11 OPS21 cl11 OPS21 cl11
20+39 *Cuica cl1 + SO3 cl5 Cuica cl1 Cuica cl1 Cuica cl1 Cuica cl1 Cuica cl1 Cuica cl1
20+39 Cuica cl1 + Bug2148 cl1 Bug2148 cl1 Bug2148 cl1 Bug2148 cl1 Bug2148 cl1 Bug2148 cl1 Bug2148 cl1
39+32 SO3 cl5 + MAS cl1 Ind ind ind ind ind
39+32 SO3 cl5 + IVV cl4 Ind ind ind ind ind ind
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Tabela X (continuação): Identificação de isolados de Trypanosoma cruzi provenientes de camundongos BALB/c com infecções mistas tratados
com benzonidazol e não curados (TNC) e não tratados (INT) pela técnica de LSSP-PCR.
Em negrito estão os genótipos e clones do T. cruzi resistentes ao benzonidazol; em vermelho estão os genótipos e clones do T. cruzi parcialmente susceptíveis ao benzonidazol e em letra normal estão os genótipos e clones do T. cruzi susceptíveis ao benzonidazol. (-) representa combinações que não foi possível fazer a identificação do clone remanescente no tecido e em branco estão representados os tecidos cuja PCR para o kDNA do T. cruzi foi negativa. *Estão as misturas que também apresentaram alteração no perfil de susceptibilidade ao benzonidazol baseado na sua infecção monoclonal. ** São as misturas que não apresentaram animais tratados e não curados (TNC).