As análises histológicas do pavilhão auricular dos animais demonstraram que aqueles que receberam apenas solução salina (controle negativo) e coradas com HE mostraram ausência de reação inflamatória (Figura 20-A). As lâminas dos animais que foram sensibilizados com óleo de cróton (controle positivo) apresentaram intenso infiltrado celular, característico de reação inflamatória (Figura 20-B)
Nas figuras 21, 22 e 23 observam-se os efeitos dos extratos de G. saccatum e P. dermoporus nos grupos dos animais tratados em concentrações de 10, 30 e 50mg/kg, respectivamente. Pode-se notar que as diferenças histológicas são visíveis, principalmente, quanto ao grau de infiltrado celular do tecido analisado, sendo estas diferenças facilmente constatadas. Pode-se perceber ainda, que a estrutura geral do tecido e o recrutamento de células para o local da inflamação sofreram uma diminuição nas três concentrações dos tratamentos testadas, entretanto, para os extratos de G. saccatum e P. dermoporus a ação foi mais eficiente nas concentrações mais baixas (Figura 21-A).
(A) (B)
FIGURA 20: Análises histológicas (HEX200) do pavilhão auricular dos grupos controle. A-
Controle negativo (salina) ; B- Controle Positivo (óleo de cróton).
(A) (B)
FIGURA 21: Análises histológicas (HEX200) do pavilhão auricular dos grupos tratados a
10mg/kg. A- Tratados com os extratos de G. saccatum, B- Tratados com os extratos de P. dermoporus.
(A) (B)
FIGURA 22: Análises histológicas (HEX200) do pavilhão auricular dos grupos tratados a
30mg/kg. A- Tratados com os extratos de G. saccatum, B- Tratados com os extratos de P. dermoporus.
(A) (B)
FIGURA 23: Análises histológicas (HEX200) do pavilhão auricular dos grupos tratados a
50mg/kg. A- Tratados com os extratos de G. saccatum, B- Tratados com os extratos de P. dermoporus.
4.9. Citotoxicidade
Os testes de citotoxicidade são baseados na capacidade que as células possuem de converter os sais tetrazolium (MTT), em um composto de coloração azul denominado formazan. Apenas as células vivas possuem essa capacidade (MOSMANN, 1983). A avaliação da transformação do MTT em formazan em células mononucleares do sangue periférico se dá através de leitura em ELISA a 540 e 620 nm.
A incubação das células com os extratos resultou na observação de uma citotóxico moderada para os extratos de G. saccatum quando comparados ao controle (P< 0,01). Apesar de citotóxicos, esses extratos não atingiram o IC50, ou seja, nestas concentrações eles não são capazes de matar a metade das células inserida nos poços (Figura 24). As células incubadas com os extratos de P. dermoporus não mostraram diferença quantitativa significante em relação ao controle (P< 0,01).
Os resultados sugerem que a citotoxicidade dos extratos de G. saccatum podem estar relacionados ao fato desses extratos, em uma determinada concentração, de serem menos eficientes na redução da quantidade de óxido nítrico (Figura 16). Vale lembrar que o potencial citotoxico de uma determinada substância pode ser resultante de uma massiva formação de NO, tendo como conseqüência a apoptose, o que justificaria seu potencial antitumoral (BRÜNE, KNETHEN, SANDAU, 1998).
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.5 1 1.5 Pg D .O. Controle Geastrum Polyporus * ** **
FIGURA 24: Efeito dos extratos sobre a transformação do MTT em formazan em células
mononucleares do sangue periférico. Os dados apresentados foram expressos em média ± SD. Os níveis de significância entre as amostras foram analisados segundo análise de variância (ANOVA) utilizando como base p< 0,001 (**) e p< 0,5 (*) indicando significância
Neste trabalho, foram testadas atividades farmacológicas com suas prováveis aplicações terapêuticas de extratos dos fungos citados. As análises químicas parciais demonstraram que estes extratos são compostos prioritariamente por polissacarídeos, sendo por tanto, considerados extratos polissacarídicos, compostos basicamente por unidade de glicose. Trabalhos recentes demonstraram que extratos solúveis em água e o precipitado etanólico obtido a partir dos corpos de frutificação do fungo Coriolus versicolor apresenta prioritariamente polissacarídeos (74%) compostos por unidades de glucose, galactose, manose, xilose e fucose, com total de proteínas chegando a 4,1% (JEONG et al, 2004).
A avaliação dos extratos de G. saccatum e P. dermoporus utilizados nesse trabalho, sobre a ação imunomodulatória demonstraram que estes extratos possuem características de compostos anti-inflamatórios, por diminuírem o número de células recrutadas para o local da inflamação e, consequentemente, reduzindo no local afetado a quantidade de óxido nítrico (potente mediador inflamatório).
As vias antiinflamatórias possuem proteínas que minimizam a quimiotaxia de leucócitos (STURN et al, 2003) e suas interações com células endoteliais (ISOBE et al, 2001), por supressão da apoptose (CHENG et al ,2003; JOYCE et al, 2001) e por reduzirem a expressão de citocinas (OELSCHLÄGER et al, 2002; YASUI et al, 2001; OKAJIMA, 2001).
Observa-se que na resposta inflamatória aguda pode haver a suspensão das vias anticoagulantes naturais por consumo, inativação proteolítica ou regulação da expressão das proteínas envolvidas nas mesmas (OPAL &
Por se tratar de um extrato polissacarídico, onde foi comprovada a existência de proteínas, Liu, Ooi & Chang (1997) relataram que extratos polissacarídicos de diversas espécies de basidiomicetos têm suas atividades antioxidantes mais exacerbada na presença de proteínas. A avaliação dos espectros de RMN e dosagens químicas, demonstraram que os extratos de G. saccatum e P. dermoporus são formados por um complexo glucana- proteína.
5.0. CONCLUSÕES
x As análises químicas e a espectroscopia de RMN dos extratos obtidos dos fungos G. saccatum e P. dermoporus demostraram que estes são compostos principalmente por polissacarídeos do tipo E- glucanas unidos a porções protéicas, formando um complexo glucana- proteína. x A ação das glucanas desses fungos sobre a varredura de radicais
superóxido demonstrou que a taxa de inibição é inversamente proporcional ao aumento de concentração do composto agindo assim, de forma dose-dependente. Para a varredura de radicais hidroxila observou-se que as glucanas analisadas agem de forma dose- dependente, sendo sua ação inibitória é diretamente proporcional ao aumento da concentração.
x Na varredura de radicais superóxidos, as glucanas de G. saccatum e P. dermoporus atingiram IC50 nas concentrações de 0,037 e 0,040 mg/ml, respectivamente. Para o IC50 com relação a varredura de radicais hidroxila, esses valores são respectivamente da ordem de 0,173 e 0,139 nos extratos de G. saccatum e P. dermoporus.
x As glucanas desses fungos têm sua atividade antioxidante confirmada pela inibição da peroxidação de lipídeos de membrana de microssomos de fígado de rato.
x A ação das glucanas como antiinflamatórias se mostrou eficiente nos modelos testados.
número de células polimorfonucleares no local da inflação, acompanha a diminuição do edema nos animais que foram tratados com as glucanas, reforçando a ação antiinflamatória desses compostos (P< 0,001).
x A atividade antiinflamatória dessas glucanas pode estar relacionada possivelmente ao seu potencial antioxidante.
x As glucanas de G. saccatum quando testadas sobre a viabilidade de células mononucleares do sangue periférico, demonstraram ação moderadamente citotóxica (P< 0,5), fato que não é apresentado para as glucanas de P. dermoporus (P<0,01).
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