4.2.1.1 Efeito dos óleos essenciais XL-OE, XF-OE e RL-OE sobre as contrações tônicas induzidas por fenilefrina em aorta de rato
Os ratos eram eutanasiados por descolamento cervical seguido pela secção dos vasos cervicais. A aorta era retirada e limpa de todo o tecido conectivo e adiposo, em seguida dividida em anéis de 3-5 mm. Os anéis aórticos eram suspensos individualmente por hastes de aço inoxidável em cubas de vidro (5 mL) contendo solução nutritiva de Krebs normal e sob tensão de 1 g. Estes tecidos eram mantidos a uma temperatura de 37 C, aerados com carbogênio, e mantidos em repouso durante no mínimo 60 minutos. Durante esse período, a solução nutritiva era renovada a cada 15 minutos para prevenir a interferência de metabólitos (ALTURA; ALTURA, 1970).
Após o período de estabilização, uma primeira contração era induzida pela adição de 3 x 10-7 M de fenilefrina (FEN). A integridade do endotélio aórtico era
verificada pela adição de acetilcolina (ACh) à cuba na concentração de 10-6 M
(FURCHGOTT; ZAWDZKI, 1980) durante a fase tônica da primeira resposta induzida por FEN, onde anéis que apresentaram relaxamentos iguais ou superiores a 50% (em relação a força de contração inicial) eram considerados com endotélio funcional (AJAYA et al., 2003). Os anéis aórticos sem endotélio eram obtidos através da retirada do mesmo, por uma leve fricção da camada endotelial que se encontra voltada para a luz do órgão utilizando-se uma haste de aço inoxidável e embebida com solução de Krebs normal. A retirada do endotélio era confirmada pela ausência de relaxamento em resposta à adição de ACh (10-6 M) à cuba ou quando este relaxamento era igual ou inferior a 10%, sendo este anel considerado sem endotélio funcional. Após a verificação da funcionalidade do endotélio, a solução de banho era trocada, sendo as preparações lavadas a cada 15 minutos com solução de Krebs normal durante um período total de 30 minutos, e durante o componente tônico de uma segunda resposta induzida por FEN, os óleos essenciais XL-OE, XF-OE e RL-OE eram adicionados, de maneira cumulativa à cuba, em preparações diferentes.
O relaxamento produzido pelos óleos essenciais foi expresso como a percentagem reversa da contração inicial induzida por FEN. Os valores da concentração dos óleos essenciais que produzem 50% do seu efeito máximo (CE50)
foram obtidos por regressão não linear a partir das curvas concentrações-resposta obtidas para os óleos essenciais em anéis com e sem endotélio funcional.
4.2.1.2 Efeito dos óleos essenciais XL-OE, XF-OE e RL-OE sobre as contrações tônicas induzidas por carbacol em traqueia de cobaia
Os cobaias eram eutanasiados por descolamento cervical seguido pela secção dos vasos cervicais. A traqueia era retirada e limpa de todo o tecido conectivo e adiposo, em seguida dividido em segmentos, contendo 3-4 anéis de cartilagem cada. Esses segmentos eram suspensos individualmente por hastes de aço inoxidável em cubas de vidro (5 mL) contendo solução nutritiva de Krebs normal e sob tensão de 1 g. Estes tecidos eram mantidos a uma temperatura de 37 C, aerados com carbogênio, e mantidos em repouso durante no mínimo 60 minutos, sendo a solução trocada a cada 15 minutos. Após o período de estabilização, uma primeira contração era induzida pela adição de 10-6 M de carbacol (CCh) à cuba.
A integridade do epitélio da traqueia era verificada pela adição de AA à cuba na concentração de 10-4 M durante a fase tônica da primeira resposta induzida por
CCh, onde anéis que apresentaram relaxamentos iguais ou superiores a 50% (em relação a contração inicial) eram considerados com epitélio funcional (TSCHIRHART et al., 1987). Os anéis de traqueia sem epitélio eram obtidos através da retirada do mesmo, por uma leve fricção da camada epitelial que se encontra voltada para a luz do órgão, utilizando-se uma haste de aço inoxidável envolta em algodão e embebida com solução de Krebs normal. A retirada do epitélio era confirmada pela ausência de relaxamento em resposta à adição de AA à cuba ou quando este relaxamento era igual ou inferior a 10%, sendo este anel considerado sem epitélio funcional. Após a verificação da funcionalidade do epitélio, a solução de banho era trocada, sendo as preparações lavadas a cada 15 minutos com solução de Krebs normal durante um período total de 30 minutos, e durante o componente tônico de uma segunda resposta induzida por CCh, os óleos essenciais XL-OE, XF-OE e RL-OE eram adicionados, de maneira cumulativa à cuba, em preparações diferentes.
O relaxamento foi expresso como a percentagem reversa da contração inicial induzida por carbacol e os valores de CE50 foram calculados como descrito no item
4.2.1.1.
4.2.1.3 Efeito dos óleos essenciais XL-OE, XF-OE e RL-OE frente às contrações fásicas induzidas por ocitocina ou por carbacol em útero de rata
O útero de rata era montado de acordo com Revuelta, Cantabrana e Hidalgo (2000). As ratas eram tratadas 24 horas antes com dietilestilbestrol (0,1 mg/kg) via subcutânea, para indução do estro. Decorrido este tempo, eram eutanasiadas por deslocamento cervical seguido de secção dos vasos cervicais. Após aberta a cavidade abdominal, era feita a dissecação do útero colocando-o em uma placa de Petri contendo solução nutritiva de Locke Ringer a 32 C sob aeração com carbogênio. Em seguida os dois cornos uterinos eram separados por meio de uma incisão, abertos longitudinalmente e suspensos verticalmente em cubas de vidro (5 mL), sob tensão de 1 g e mantidos em repouso durante no mínimo 40 minutos, sendo a solução trocada a cada 15 minutos. Após o período de estabilização, era induzida uma contração isotônica com KCl 60 mM para verificar a funcionalidade do órgão. A preparação era lavada e após 15 minutos, eram induzidas duas contrações isotônicas de magnitude similares com 10-2 UI/mL de ocitocina (OCI) ou com 10-5 M
de CCh. Os óleos essenciais eram incubados por 15 minutos em preparações diferentes, e na presença do óleo essencial era induzida uma terceira contração utilizando um dos agonistas. A inibição da resposta submáxima de OCI e de CCh era avaliada por comparação das respostas antes (controle) e após a adição dos compostos à cuba. Os valores da concentração dos óleos essenciais que inibem 50% do efeito máximo produzido por um agonista (CI50) foram obtidos por regressão
4.2.1.4 Efeito dos óleos essenciais XL-OE, XF-OE e RL-OE frente às contrações fásicas induzidas por carbacol ou por histamina em íleo de cobaia
O íleo de cobaia era preparado de acordo com Daniel et al. (2001). Os cobaias eram mantidos em jejum por um período de 18 horas (dando-lhe somente água nesse período). Após este período os animais eram eutanasiados por deslocamento cervical seguido de secção dos vasos cervicais. O abdômen era aberto e um segmento do íleo de aproximadamente 15 cm de comprimento era retirado e colocado em uma placa de Petri contendo solução nutritiva de Krebs modificado a 37 C sob aeração com carbogênio. Após a dissecação, o segmento do íleo era seccionado em fragmentos de 2-3 cm de comprimento, suspensos individualmente em cubas de vidro (5 mL) e deixados em repouso por 30 minutos, durante este período a solução nutritiva era trocada a cada 15 minutos. Após o período de estabilização, era induzida uma contração isotônica com KCl 40 mM para verificar a funcionalidade do órgão. A preparação era lavada e após 15 minutos, eram induzidas duas contrações isotônicas de magnitude similares com 10-6 M de CCh ou de histamina. Os óleos essenciais eram incubados por 15 minutos em preparações diferentes, e na presença do óleo essencial era induzida uma terceira contração utilizando um dos agonistas. A inibição da resposta submáxima de CCh e de histamina era avaliada por comparação das respostas antes (controle) e após a adição dos compostos à cuba. Os valores de CI50 eram obtidos como descrito
anteriormente.