Os experimentos in vitro deste estudo revelaram que diferentes fármacos
estabilizadores do humor, a saber, Li, VPA e LTG foram capazes em induzir a expressão de
Ncs-1 em células PC12. Diferente da literatura científica, este efeito ocorreu
independentemente de dano celular, já que as concentrações testadas não reduziram a
viabilidade das células. Baseando-se nestes dados preliminares, hipotetizou-se que a indução
da expressão de Ncs-1 poderia estar relacionada com o mecanismo farmacológico dos
compostos testados e, por conseguinte, seria interessante avaliar se este mesmo efeito sobre a
expressão de Ncs-1 poderia ocorrer in vivo. Para isso, foram realizados tratamentos crônicos
com Li, VPA e LTG em camundongos. Tais fármacos foram os escolhidos em virtude do
efeito previamente observado sobre o conteúdo intracelular de Ncs-1 in vitro. Terminado o
tratamento, o cérebro dos animais foi removido para a avaliação dos níveis de Ncs-1.
O tratamento crônico foi realizado de acordo com dados em publicação do nosso
grupo mostrando que, nestas condições, todos os três fármacos, guardando-se as devidas
proporções, possuem eficácia antidepressiva e ansiolítica. Para este tratamento crônico, os
animais foram expostos aos fármacos por 15 (Li) ou 21 dias (VPA e LTG). Findo o último dia
tratamento (15° ou 21° dia), os animais foram decapitados e os tecidos cerebrais foram
imediatamente dissecados e armazenados a -80 °C.
O efeito do tratamento crônico sobre a expressão cerebral de Ncs-1 variou tanto entre
as regiões cerebrais investigadas quanto aos fármacos empregados. Por exemplo, VPA e Li
foram capazes de induzir a expressão de Ncs-1 no córtex frontal em cerca de 76% (p < 0,01) e
96% (p < 0,01), respectivamente (Figura 34 A e B). No entanto, nenhum efeito destes
fármacos sobre a expressão de Ncs-1 foi observada no estriado (Figura 34 C e D).
Li e VPA, já que diminuiu expressão de Ncs-1. Além disso, LTG obteve ação sobre as duas
regiões cerebrais analisadas, onde foi encontrada uma redução da expressão de Ncs-1 em
cerca de 65% (p < 0,05) e 64% (p < 0,05) no córtex frontal e estriado, respectivamente
(Figura 34 A-D).
Lítio Valproato Lamotrigina
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 ** ** * Nc s -1 / β -a c tin a (re la tiv o a o c o n tro le )
Lítio Valproato Lamotrigina
0.0 0.5 1.0 1.5 Controle Tratado * Nc s -1 / β -a c tin a (re la tiv o a o c o n tro le )
A Córtex Frontal C Estriado
Ncs-1 Actina Ctrl Li Ctrl VPA Ctrl LTG Ncs-1 Actina Ctrl Li Ctrl VPA Ctrl LTG
Córtex Frontal Estriado
B D
Figura 34. Tratamento crônico com estabilizadores do humor modulam a expressão de Ncs- 1 no cérebro de camundongos. Os animais da linhagem C57 B/L WT foram expostos ao Li (0,12% por dia administrado na água, ingestão livre, N = 5 animais), VPA (misturado a ração que corresponde a 25 mg/kg por dia, ingestão livre, N = 5 animais) ou LTG (20 mg/kg por dia dissolvido em água e tween 1%, i.p., N = 5 animais) por 15 (Li) ou 21 (VPA e LTG) dias consecutivos. Para cada fármaco testado, um grupo de 5 animais administrado com o veículo de diluição do composto correspondente foi utilizado como grupo controle. (A e B) Representação gráfica da análise densitométrica e western blot da expressão de Ncs-1 (normalizada pelos níveis de actina) no córtex frontal ou estriado (C e D) após o tratamento crônico. Para todos as análises de densitometria, os resultados estão apresentados como unidades arbitrárias normalizadaspela expressão de Ncs-1/actina encontrado no grupo controle correspondente. Ctrl: controle; Li: cloreto de lítio; VPA: valproato de sódio; LTG: lamotrigina. Os resultados nos gráficos representam a média ± SEM. * p < 0,05; ** p < 0,01 ( t teste).
Assim como encontrado em células PC12, o tratamento in vivo com Li e VPA foi
capaz de elevar os níveis de Ncs-1.
A próxima pergunta do trabalho foi avaliar se o efeito destes fármacos sobre a
expressão de Ncs-1 difere entre o regime de tratamento crônico e agudo. Em outras palavras,
esta comparação visa saber se o aumento de Ncs-1 está (ou não) especificamente associado
com a fase de resposta terapêutica do tratamento farmacológico. Isso decorre, em geral, ao
fato do tratamento agudo com Li, VPA e LTG não ser reportado exercer benefício terapêutico
em modelos animais, apesar de algumas divergências (BEAULIEU et al., 2009; CAN et al.,
2011). Apesar desta particularidade ainda não ser bem entendida, a comparação dos efeitos
bioquímicos em animais tratados cronicamente ou com uma simples dose, é, até certo ponto,
interessante para diferenciar os efeitos terapêuticos daqueles secundários mediados por
estabilizadores do humor. Para tal, o tratamento agudo foi realizado em camundongos com
uma aplicação intraperitoneal (i.p.) única de uma dose mais alta que a dose diária utilizada no
tratamento crônico. Os animais foram decapitados 30 minutos (Li), duas horas (VPA) ou uma
hora (LTG) após a administração dos fármacos para se quantificar os níveis cerebrais de Ncs-
1. Para este tipo de tratamento, a análise da expressão de Ncs-1 foi realizada apenas no córtex
frontal pois o objetivo do experimento foi avaliar se, a curto prazo, existe ou não o mesmo
perfil de elevação de Ncs-1 nesta região como observado no tratamento crônico.
Ao contrário do tratamento crônico, Li e VPA não foram capazes de induzir a
expressão de Ncs-1 através do tratamento agudo (Figura 35 A e B). Apesar de diminuir a
expressão de Ncs-1 através do tratamento crônico, a LTG, surpreendentemente, foi capaz de
induzir os níveis da proteína em cerca de 29% no regime de tratamento agudo (p < 0,05)
Lítio Valproato Lamotrigina 0.0 0.5 1.0 1.5 * Controle Tratado Nc s -1 / β -t u b u lin a (re la tiv o a o c o n tro le ) Ncs-1 Tub Ctrl Li Ctrl VPA Ctrl LTG A B
Figura 35. Efeito do tratamento agudo com estabilizadores do humor na expressão de Ncs-1 no córtex frontal de camundongos. Os animais da linhagem C57 B/L WT foram injetados intraperitonialmente (i.p.) com Li (200 mg/kg, diluído em NaCl 0,9%, N = 5), VPA (400 mg/kg, diluído em NaCl 0,9%, N = 5) ou LTG (20 mg/kg, diluído em água e tween 1%, N = 5) e após 30 min (Li), 2 h (VPA) ou 1 h (LTG), foram decapitados. Para cada fármaco testado, um grupo de 5 animais administrados intraperitonialmente com o veículo de diluição do composto correspondente foi utilizado como grupo controle. (A e B) Representação gráfica da análise densitométrica e western blot da expressão de Ncs-1 (normalizada pelos níveis de tubulina) no córtex frontal após o tratamento. Para todos as análises de densitometria, os resultados estão apresentados como unidades arbitrárias normalizadaspela expressão de Ncs-1/tubulina encontrado no grupo controle correspondente. Ctrl: controle; Li: cloreto de lítio; VPA: valproato de sódio; LTG: lamotrigina. Os resultados nos gráficos representam a média ± SEM. * p < 0,05; ** p < 0,01 ( t teste).
Os resultados obtidos através do tratamento crônico com estabilizadores do humor in
vivo reforçam a idéia de que Li e VPA, mas não LTG, possuem a mesma habilidade em induzir um aumento localizado na expressão cerebral do Ncs-1.
4.1.4 Efeito do tratamento com fármacos estabilizadores do humor nos níveis de RNAm