Em geral, triterpenos pentacíclicos possuem atividade antiinflamatória, gastroprotetora, antinociceptiva e antitumoral (FINNEY & TARKNOY, 1960; INOUE et al., 1990; NAVARRETE et al., 2002; FERNANDES et al., 2003). Os modelos utilizados neste estudo (lesões gástricas induzidas por etanol, etanol acidificado, secreção ácida gástrica por piloro ligado e lesões gástricas induzidas por indometacina) são modelos clássicos de avaliação de drogas com atividade citoprotetoras/antiulcerogênicas. Assim, investigou-se a atividade gastroprotetora da resina de P. heptaphyllum.e de seus principais
constituintes, a mistura binária de triterpenos α- e β-amirina.
4.4.1. Efeito da resina de P. heptaphyllum na úlcera gástrica induzida por etanol
Camundongos Swiss, machos, 25-30 g, divididos em grupos de 8 animais cada, em jejum de sólidos de 24 h, foram tratados, via oral, com veículo (3% de Tween 80 em salina 0,9%, 10 mL/kg), resina (200 e 400 mg/kg) ou N-acetilcisteína (NAC - 750 mg/kg, i.p.).
Uma hora após os tratamentos os animais receberam 0,2 mL de etanol 96% e após 30 minutos foram sacrificados, os estômagos retirados e a área de lesão gástrica
glandular determinada por planimetria e os dados expressos em termos de percentagem (ROBERT et al., 1979). Para a determinação dos grupos sulfidrilas não protéicos (NP-SH) a porção glandular foi processada de acordo com Sedlak & Lindsay (1968).
4.4.2. Efeito da resina de P. heptaphyllum na úlcera gástrica induzida por etanol acidificado
Camundongos Swiss, machos, 25-30 g, divididos em grupos de 8 animais cada, em jejum de sólidos de 18h, foram tratados, via oral, com veículo (3% de Tween 80 em salina 0,9%, 10 mL/kg), resina (200 e 400 mg/kg) ou N-acetilcisteína (NAC - 750 mg/kg, i.p.).
Uma hora após os tratamentos os animais receberam 0,2 mL de uma solução de 0,3M de HCl em etanol 60% e após 1h foram sacrificados, os estômagos retirados e a área de lesão gástrica glandular determinada por planimetria e os dados expressos em termos de percentagem (MIZUI et al., 1987).
4.4.3. Efeito da resina de P. heptaphyllum sobre a secreção gástrica em modelo de ligação do piloro
Ratos, Wistar, machos, 150-180 g, divididos em grupos de 6 animais cada, em jejum de sólidos de 24 h, foram anestesiados e realizada a ligação do piloro (SHAY et al., 1945). Veículo (3% de Tween 80 em salina 0,9%, 10 mL/kg), resina (200 e 400 mg/kg) ou
cimetidina (100 mg/kg) foram administradas por via intraduodenal imediatamente após a ligação do piloro em um volume de 2,5 mL/kg.
Após 4h da ligação do piloro, os animais foram sacrificados, a cárdia foi amarrada para evitar uma possível perda do material secretado, e o estômago retirado, lavados externamente com água destilada e secado em papel de filtro. O conteúdo gástrico foi coletado em tubos de ensaio e centrifugados a 1500 rpm por 30 minutos. O volume do sobrenadante foi mensurado em proveta e a acidez total gástrica foi determinada através de titulação com NaOH 0,1 N, utilizando fenolftaleína 2% como indicador ácido-base (REITMAN et al., 1970).
4.4.4. Efeito da da resina de P. heptaphyllum sobre as úlcera gástrica induzida por indometacina
Camundongos Swiss, machos, com peso de 25-30 g, divididos em grupos de 8 animais, em jejum de sólidos de 18 h, foram tratados, via oral, com veículo (3% de Tween 80 em salina 0,9%, 10 mL/kg), resina (100 e 200 mg/kg) ou cimetidina (100 mg/kg, v.o.). Após uma hora, os animais foram tratados por via subcutânea com indometacina (20 mg/kg), preparada com 0,5 % de carboximetilcelulose e 8 horas depois, os animais foram sacrificados por deslocamento cervical. De acordo com BHARGAVA (1973), os estômagos foram retirados, instilados com formalina a 5 % por 15 minutos, abertos ao longo da grande curvatura, lavados em salina e inspecionados para atribuições de escores de acordo com SZABO et al. (1985) abaixo descrito, onde n corresponde ao número de úlceras encontradas.
1. Perda de pregas da mucosa... 1 ponto
2. Descoloração da mucosa... 1 ponto
3. Edema... 1 ponto 4. Hemorragias... 1 ponto 5. Número de petéquias - até 10... - mais de 10... 2 pontos 3 pontos 6. Intensidade da ulceração
- úlceras ou erosão de até 1mm... - úlceras ou erosão maiores que 1mm... - úlceras perfuradas...
n x 2 pontos n x 3 pontos n x 4 pontos
4.4.5. Efeito da mistura de α- e β-amirina na úlcera gástrica induzida por etanol: papel dos neurônios aferentes primários sensíveis à capsaicina
Sabendo-se que os neurônios aferentes sensíveis à capsaicina participam no
mecanismo de defesa da mucosa gástrica (HOLZER & LIPPE, 1988), verificamos um
possível papel destes fibras sensoriais na gastroproteção exercida pelos triterpenos α- e β-
amirina.
Para tanto, camundongos Swiss, machos, 25-30 g, divididos em grupos de 8 animais cada, em jejum de sólidos de 18 h, foram tratados, via oral, com veículo (3% de
Tween 80 em salina 0,9%, 10 mL/kg), mistura de α- e β-amirina (50, 100, 300 e 600
mg/kg) ou capsaicina (2,5, 5, 15 e 20 mg/kg). Uma hora após os tratamentos os animais receberam 0,2 mL de etanol 96% e após 30 min foram sacrificados, os estômagos retirados
e a área de lesão gástrica glandular determinada por planimetria e os dados expressos como percentagem (ROBERT et al., 1979).
A participação dos neurônios aferentes sensíveis à capsacina no efeito gastroprotetor das amirina (100 mg/kg, via oral) no modelo de úlcera gástrica induzida por etanol foi investigado em camundongos dessensibilizados com capsaicina. Para isso, Camundongos machos, 25-30 g, foram anestesiados com pentobarbital sódico e tratados com capsacina, duas injeções de 25 mg/kg por via intraperitoneal, por três dias consecutivos (MATSUDA & YOSHIKAWA, 1999).
Para prevenir alguma dificuldade respiratória associada ao tratamento com capsaicina, os animais foram pré-tratados com aminofilina (10 mg/kg, i.m.) antes da administração de capsacina. Após oito dias, a depleção pela capsacina foi avaliada pela
instilação ocular de uma solução de capsacina 10 µg/mL, a ausência de reflexo ocular foi
considerada como dessensibilização dos neurônios sensoriais aferentes.
Animais dessensibilizados e animais normais, divididos em grupos de 8 animais cada, em jejum de sólidos de 18h, foram tratados, via oral, com veículo (3% de Tween 80
em salina 0,9%, 10 mL/kg) ou mistura de α- e β-amirina (100 mg/kg). Uma hora após os
tratamentos os animais receberam 0,2 mL de etanol 96% e após 30 min foram sacrificados, os estômagos retirados e a área de lesão gástrica glandular determinada por planimetria.