Mathias Eide Sataøen: Tur, Retur, Protest

Neste trabalho foram utilizadas as regiões de UV e IF para identificação dos antibióticos e confirmação de suas absorções. Com relação à espectrofotometria no UV é uma técnica para medir o grau de absorção de luz entre os comprimentos de onda 200 nm a 800 nm, para investigar a identidade e pureza das substâncias (JP XVI, 2007; SÁNCHEZ ROJAS; BOSCH OJEDA, 2009; SPINELLI; GONZALEZ, 2007).

As medidas geralmente são realizadas quando luz monocromática passa por uma substância em solução, a proporção de luz transmitida é I e a intensidade da luz incidente é I0, expressas em transmitância; transmitância expressa em percentagem é denominada transmissão T, e o logaritmo do inverso da transmitância são nomeados de absorbância (EUROPEAN PHARMACOPOEIA COMMISSION, 2008; JP XVI, 2007; MOAN, 2001).

Nestas medidas, o espectro de absorção das substâncias presente na solução é característico, dependendo da sua estrutura química.

Esta técnica tem sido aplicada para vários sistemas químicos, como produtos farmacêuticos, alimentos, cosméticos e amostras ambientais (SHEN, 2011; VETUSCHI et al., 2005; ZEITLER et al., 2007), bem como o tratamento de dados espectrofotométricos têm sido abordadas, com o objetivo de extrair uma maior quantidade de informação analítica, a partir de espectros de bandas não resolvidas (SÁNCHEZ ROJAS; BOSCH OJEDA, 2009).

Os recentes avanços em detectores sensíveis de fibra óptica de eletrônica de alta velocidade e softwares poderosos tem-se destacado nesses trabalhos. Uma vez que, a utilização de fibras ópticas, como orientadora da luz, permite uma grande modularidade e flexibilidade na criação de um sistema de medição óptica. Estes novos espectrômetros usam dispositivos que oferecem excelente desempenho e amplas aplicações da espectroscopia de UV a NIR. Esses instrumentos são considerados de baixo custo e de ótima robustez, esses parâmetros têm revolucionado a detecção na espectroscopia, devido à sua combinação única de sensibilidade excepcional e de alta velocidade na coleta dos espectros.

3.1.2.1 Importância da Região no Ultravioleta e Infravermelho Próximo

Por um longo tempo, absorções na região do infravermelho próximo (NIR) na região de 750 – 2500 nm foram consideradas de interpretação complexa, contrariando o fato de que essas absorções são harmônicas e apresentam bandas vibracionais do tipo C – H, N – H e S – H., e como tais, não só são muito menos intensas, mas também é complexa a atribuição das principais características dos grupos funcionais presentes nas amostras, como é realizado no infravermelho médio (HOSHI, 2007; MARIN; MOORE, 2011; SIESLER et al., 2008; WORKMAN, 1996).

Neste aspecto, Plugge e Van Der Vlie (1992) apresentam vantagens para aplicações quantitativas são elas: as amostras podem ser medidas como tal na refletância ou de transmissão, sem qualquer preparação e (adição de solventes ou qualquer outro diluente). Desta forma, o NIR despontou como uma ferramenta útil em diferentes campos industriais onde se exijam matérias primas de qualidade. Seu uso em análise farmacêutica é bastante comum como método de rotina.

Vários comentários têm sido propostos incluindo variadas aplicações, tais como: a identificação de matérias-primas, a determinação do tamanho de partícula e dos principais componentes (BLANCO; PEGUERO, 2010; DUNN et al., 1998; LUYPAERT; MASSART; VANDER HEYDEN, 2007; LYON et al., 2002; SARRAGUÇA; LOPES, 2009; SCAFI; PASQUINI, 2001a).

As técnicas expectroscopias na região do UV VIS NIR, também tem sido utilizada para determinações quantitativas de compostos específicos em matrizes complexas, como, por exemplo, uma preparação farmacêutica (BARTON et al., 2002). As etapas podem incluir a realização de procedimentos tradicionais como espectrometria no UV e emprego de métodos

colorimétricos (KARPIŃSKA; MIKOŁUĆ; PIOTROWSKA-JASTRZEBSKA, 1998). Porém

somente podem ser válidas se fundamentadas em métodos referência oficialmente reconhecidos.

As principais fases para desenvolver o método incluem etapas como: divisão dos dados em grupos de calibração (ou treino) e definição de um conjunto de dados. Neste aspecto, é importante que o conjunto da calibração cubra a maior parte da variabilidade que é esperada a partir de amostras externas (BODSON et al., 2006; SCAFI; PASQUINI, 2001b). Para isso os espectros NIR das amostras de calibração devem ser matematicamente relacionados com a propriedade de interesse (por exemplo, concentração). Através da utilização de ferramentas quimiométricas, é possível construir os modelos, porém é necessário planejar as condições das variáveis, a fim de chegar a um melhor ajuste entre a medida de referência das amostras de calibração, e consequentemente dos valores previstos pelo modelo que são testados para comprovação do desempenho (AGELET; HURBURGH, 2010; SAUER; KIM, 2011; SMALL, 2006; WORKMAN, 2007; ZHANG et al., 2015).

Logo, a aplicação do NIR para análise quantitativa exige o emprego de técnicas multivariadas na calibração e cuidadosa seleção de amostras representativas, a fim de construir modelos que representem a realidade, assim a regressão por quadrados parciais (PLS) tem sido muito utilizada para desenvolvê-los com capacidade de previsão e adequada seleção de variáveis (ABDI, 2003; BASTIEN; VINZI; TENENHAUS, 2005; RUDNITSKAYA et al., 2013; STENBERG et al., 2010; TENENHAUS et al., 2005), uma vez que essas abordagens têm sido ferramentas de simples execução, e principalmente rápidas na construção dos modelos de calibração PLS.

Algumas das aplicações estão focadas na quantificação de medicamentos (GRÜNHUT et al., 2008; KHOSHAYAND et al., 2008; TER LAAK; GEBBINK; TOLLS, 2006). Por exemplo, Ali, Sherazi e Mahesar 2012 que desenvolveram um método para a quantificação de eritromicina em comprimidos, usando espectroscopia em FTIR para análise de rotina. Neste trabalho não houve preparo de amostra, exceto a formação de “sedimento” para análise (ALI; SHERAZI; MAHESAR, 2012). Enquanto que os pesquisadores Li et al (2015), apresentaram um método de modelagem baseado na técnica EDSPLS. Segundo os autores o procedimento gerou resultados de predição muito robustos, pois a partir de experimentos com dois conjuntos de dados, foram construídos bons modelos de calibração, sem aumentar a complexidade do ponto de vista do analista, sendo um método adequado para validação externa. Esta ferramenta é aplicada em espectros no NIR e MIR.

3.1.2.2 Importância da aplicação da Espectroscopia no Infravermelho Médio

A espectrofotometria na região do infravermelho médio é utilizada também como um teste de identificação. O espectro de infravermelho é único para qualquer dado composto químico com a exceção de isômeros óticos que possuem espectros idênticos em solução. Apesar de a espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) e espectrometria de massas (MS) serem amplamente utilizados na indústria farmacêutica para a identificação de substâncias medicamentosas, esta técnica pode ser aliada no fornecimento informação adicional quanto às estruturas, tal como a presença de grupos funcionais característicos (STUART, 2004; WHARTON, 2000).

Os dados obtidos por FTIR apresentam concordância com os obtidos por um método de referência com base, por exemplo, em espectrometria de ultravioleta (BERTHOMIEU; HIENERWADEL, 2009; HSU, 1997). Os procedimentos desenvolvidos oferecem uma boa alternativa para identificação dos compostos (AMARIE; GANZ; KEILMANN, 2009; MOROS; GARRIGUES; DE LA GUARDIA, 2007; ZEITLER et al., 2007). Outros procedimentos têm sido relatados para quantificação de grupos fenólicos em matrizes alimentares (KYRALEOU et al., 2015).

3.1.3 Considerações sobre a Aplicação dos Métodos Cromatográficos no Controle de