6.1.1 Fungos patógenos: Candida albicans e Candida tropicalis.
Espécies de Candida se constituem em fungos leveduriformes freqüentemente responsáveis por infecções superficiais ou sistêmicas em pacientes imuno-comprometidos, tais como recém-transplantados, HIV-soropositivos ou indivíduos sob terapias imuno-supressivas. 101
Drogas poliênicas, como nistatina e anfotericina, e azólicas, como fluconazol e cetoconazol, são normalmente empregadas no tratamento infecções fúngicas. A primeira classe de medicamentos citada atua na membrana fúngica por inserção, ocasionando a formação de poros que interferem na permeabilidade da mesma, causando perda de macromoléculas e íons essenciais à sobrevivência da célula. 102 A atividade antifúngica de derivados azólicos
baseia-se, principalmente, na inibição biossintética de ergoesterol, um importante lipídio presente na membrana responsável por garantir as funções de permeabilidade e estrutural em espécies fúngicas. 2, 103 Mecanismos de resistência de leveduras a antifúngicos disponíveis no
mercado têm sido relatados, 104 assim como problemas relacionados à toxicidade e baixa
absorção oral, fatores que reforçam a necessidade de novas formulações.
6.1.1 (a) Teste de difusão em ágar.
O teste de difusão em ágar 105 foi empregado com o objetivo de avaliar inicialmente a
atividade dos derivados ditiocarbamatos de Sn(IV) frente aos microorganismos C. albicans (ATCC 18804), C. tropicalis (ATCC 750) e uma cepa de C. albicans isolada a partir de indivíduos HIV-soropositivos com candidíase bucal. A atividade dos complexos, mensurada a partir dos diâmetros dos halos de inibição, em função da concentração é mostrada no Quadro 6.1.
O solvente utilizado (diclorometano) apresentou uma zona de inibição constante (7,0 mm) no experimento envolvendo C. tropicalis. Assim, somente diâmetros maiores que este foram considerados ativos para este microorganismo. Com relação às outras leveduras em estudo, foram considerados ativos os compostos que apresentaram zonas de inibição maiores
101 De Pauw BE. Eur. J. Clinical Microb. Infect. Dis. 1997; 16: 32.
102 Burgess DS, Hastings RW, Summers KK, Hardin TC, Rinaldi MG.Diagn. Microbiol. Infect. Dis.2000; 36: 13.
103 (a) Barry AL, Brown SD. Antimicrob. Agents Chemother. 1996; 40: 1948. (b) Hay RJ. J. Antimicrob.
Chemother. 1987; 20: 1.
104 (a) Balkis MM, Leidich SD, Mukherjee PK, Ghannoum MA. Drugs 2002; 62: 102. (b) White T, Marr K,
que 6,0 mm (valor este correspondente ao diâmetro dos discos utilizados no experimento). Os sais dos ligantes, pirrolidino e dietil ditiocarbamatos de amônio e sódio, respectivamente, bem como os reagentes de partida usados na obtenção dos complexos de Sn(IV) em questão não apresentaram ação inibitória frente aos fungos relatados. Por outro lado, todos os compostos em estudo apresentaram notável atividade frente aos microorganismos testados, conforme mostram os dados dispostos no Quadro 6.1.
Quadro 6.1 – Diâmetros de inibição para os derivados ditiocarbamatos de Sn(IV)
Zo na de Inibiç ã o / m m *
C o m ple xo Microorganismo: Candida albicans ATCC 18804
1 11,0 11,4 12,0 12,0 13,6 13,8 19,5 19,7 2 8,4 8,5 9,0 9,3 9,3 10,3 10,5 10,5 3 9,4 9,8 10,0 10,2 10,3 11,2 11,6 11,6 4 11,7 12,0 11,8 13,2 14,3 14,8 14,5 14,4 5 9,0 9,8 10,0 10,8 10,7 10,7 10,7 10,7 6 9,0 9,0 10,0 10,3 10,3 10,3 10,3 10,3 7 9,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,3 10,3 10,3 8 9,2 9,2 9,2 10,1 10,0 10,5 11,0 13,0 9 *** *** *** *** *** *** *** 8,0 10 15,0 14,8 15,0 15,0 15,0 15,0 16,0 16,4
C o m ple xo Microorganismo: Candida tropicalis ATCC 750
1 *** *** *** *** *** *** *** 8,0 2 *** *** *** *** *** *** 7,5 9,0 3 *** *** *** *** *** 8,0 10,0 13,0 4 *** *** *** *** *** *** *** 10,0 5 *** *** *** *** *** *** *** 9,0 6 *** *** *** *** *** *** 7,5 8,5 7 *** *** *** *** *** *** 7,5 8,5 8 *** *** *** *** *** 8,5 10,0 12,0 9 *** *** *** *** *** *** *** 8,5 10 *** *** *** *** *** *** 8,0 9,0
C o m ple xo Microorganismo: C. albicans – isolado clínico
1 *** *** *** *** *** *** 9,5 12,0 2 *** *** *** *** *** *** 7,0 9,5 3 *** *** *** *** 8,0 10,0 12,0 14,5 4 *** *** *** *** *** 7,0 10,0 12,5 5 *** *** *** *** *** 7,0 7,5 9,0 6 *** *** *** *** *** 7,0 9,0 12,0 7 *** *** *** *** *** *** 7,0 8,5 8 *** *** *** *** *** 8,5 10,0 14,0 9 *** *** *** *** *** *** *** 8,0 10 *** *** *** *** *** *** 7,5 9,0 C o nc e ntra ç ã o / m m o lL- 1 0,025 0,050 0,100 0,200 0,400 0,800 1,600 3,200
Os compostos em estudo se mostraram ativos em todas as concentrações testadas para C. albicans ATCC 18804. Porém, com relação à C. tropicalis e à amostra de C. albicans isolada clinicamente, a atividade foi restrita somente a concentrações mais elevadas.
Com relação à levedura C. albicans ATCC 18804, os compostos [Sn{S2CN(CH2)4}2Cl2] (1)
e [Sn{S2CN(C2H5)2}Cy3] (10) apresentaram notável atividade em relação aos demais, seguidos
dos derivados butílico e trifenílico, [Sn{S2CN(CH2)4}2Bu2] (4) e [Sn{S2CN(C2H5)2}Ph3] (8). Os
complexos [Sn{S2CN(CH2)4}Cy3] (5), [Sn{S2CN(C2H5)2}2Cl2] (6) e [Sn{S2CN(C2H5)2}2Cl2] (7)
apresentaram zonas de inibição praticamente estáveis (em torno de 10,0 mm) em todas as concentrações testadas e o derivado [Sn{S2CN(CH2)4}3Ph] (9) mostrou-se ativo apenas à
concentração de 3,2 mmolL-1, mais elevada. Os complexos [Sn{S2CN(CH2)4}2Ph2] (2) e
[Sn{S2CN(CH2)4}Ph3] (3) apresentaram halos de inibição aproximadamente entre 8,0 - 10,5 e 9,0 -
11,0, nesta ordem.
No experimento envolvendo o microorganismo C. tropicalis foi evidenciada uma maior atividade para os derivados trifenílicos, compostos 3 e 8, com halos de inibição variando entre 8,0 - 13,0 e 8,5 - 12,0 mm, respectivamente. O complexo 4 apresentou considerável atividade apenas à concentração mais elevada com uma zona de inibição de 10,0 mm. Os demais compostos em estudo revelaram atividades inibitórias com diâmetros variando entre 7,5 e 9,0 mm.
Para a amostra clínica de C. albicans, os complexos trifenílicos e butílico 3, 4 e 8
apresentaram zonas de inibição de 14,5; 12,5 e 14,0 mm; nesta ordem, à concentração de 3,2 mmolL-1. Os compostos clorados, 1 e 6, apresentaram halos de, no máximo, 12,0 mm. O
derivado dibutílico, complexo 4, apresentou uma atividade expressiva à concentração mais elevada (12,5 mm) e os demais complexos mostraram-se menos ativos com diâmetros variando entre 7,0 - 9,5 mm.
Durante os ensaios, as drogas poliênica e azólica, nistatina e fluconazol, respectivamente, foram usadas como controles. Paras estes padrões (suspensão contendo concentração aproximada de 25 mmolL-1 para nistatina e discos impregnados com 25 µg de
fluconazol) foram observados diâmetros correspondentes a 14 e 22 mm para nistatina e fluconazol, nesta ordem, frente tanto à C. albicans quanto à C. tropicalis. Ambos os controles não apresentaram atividade inibitória frente à amostra clínica. Para uma direta comparação entre as atividades dos compostos em estudo e das drogas-padrão deve-se considerar a diluição realizada durante o experimento: 10 µL de soluções estoque dos compostos (0,025; 0,050; 0,100; 0,200; 0,400; 0,800; 1,600 and 3,200 mmolL-1) pipetados sobre cada disco, levando
a massas após evaporação do solvente variando aproximadamente entre 2,5 e 320 µg, de acordo com os valores das massas molares de cada complexo. O mesmo procedimento foi aplicado aos controles contendo nistatina, levando à quantidades de, aproximadamente, 250 µg em cada disco.
Novamente através dos dados expostos no quadro 6.1, observa-se que todos os compostos em quantidades próximas a 25 µg (quantidade também contida no controle- padrão da droga fluconazol) não apresentaram atividade frente à C. tropicalis e à espécie clínica, sendo esta última resistente ao controle em questão. Embora seja observada atividade inibitória de todos os complexos na quantidade especificada para o fungo C. albicans ATCC 18804, as zonas de inibição presentes são consideravelmente menores que a exibida pelo controle contendo fluconazol, 22 mm. Já com relação ao controle contendo a droga nistatina, observam-se halos de inibição consideravelmente maiores que 14 mm para os compostos 1 e