1. INTRODUCTION
2.1 Cloning Of Putative PTS-Containing Phosphatases
2.1.4 Cloning and sub-cloning
O presente estudo foi realizado no Hospital Veterinário do Restelo durante período compreendido entre Outubro de 2016 e Maio de 2017, incidindo sobre todos os animais (cães e gatos) que se apresentaram à consulta externa com diagnóstico de doença neoplásica. Alguns animais, posteriormente, foram retirados do estudo, ou pelo não seguimento do tratamento, ou por o mesmo não ter sido concluído.
Devido à reduzida amostra, e de forma a facilitar a análise estatística, os animais foram agrupados de acordo com o tipo de neoplasia e o estudo dos dados foi feito em relação a cada grupo.
1. Objectivos
Esta dissertação de mestrado tem como objetivo avaliar a alteração dos valores de lactato plasmático ao longo do tratamento quimioterápico.
Em termos clínicos este estudo poderá contribuir para perceber se o lactato pode ser utilizado ou não, como um parâmetro fidedigno, na avaliação da resposta terapêutica.
2. Material e Métodos
2.1. Amostra
O presente estudo foi realizado com uma amostra total de 13 indivíduos (n=13). De forma a uniformizar a análise estatística estes foram divididos em quatros grupos, de acordo com o tipo de neoplasia: Linfoma, Carcinoma, Hemangiossarcoma e Outros.
No grupo Linfoma, foram agrupados 3 indivíduos diagnosticados com linfoma: linfoma esplénico indolente, linfoma de grau intermédio e linfoma multicêntrico.
No grupo Carcinoma foram agrupados 4 indivíduos com: Carcinoma no trígono vesical, carcinoma broncoalveolar, carcinoma duodenal, carcinoma nasal das células de transição. No grupo Hemangiossarcoma foram agrupados 2 indivíduos com hemangiossarcoma esplénico e hemangiossarcoma nasal.
No grupo Outros foram agrupados 4 indivíduos com: melanoma oral, mastocitoma, neoplasia oral e neoplasia maligna indiferenciada.
2.1.1 Critérios de inclusão de animais no estudo
no Hospital Veterinário do Restelo (HVR), entre Outubro de 2016 e Maio de 2017, com diagnóstico de neoplasia e sem ter realizado tratamento quimioterápico anteriormente. Foram admitidos pacientes de qualquer raça, idade, sexo, estado reprodutivo do HVR ou referenciados de outras clínicas ou hospitais veterinários de qualquer raça, idade, sexo e estado reprodutivo.
2.1.2. Critérios de exclusão de animais no estudo
Foram excluídos todos os animais que já alguma vez tivessem realizado quimioterapia. Também foram excluídos animais que, apesar de diagnosticados com neoplasia no HVR, não foram lá acompanhados e/ou animais cujos donos não quiseram prosseguir com tratamento quimioterápico ou desistiram a meio.
2.2. Colheita da amostra/Protocolo
As medições de lactato foram realizadas antes de cada sessão de quimioterapia, através de uma gota do sangue recolhido para a realização do hemograma de controlo (contagem total de leucócitos, eritrócitos e plaquetas, hemoglobina, hematócrito, Volume Corpuscular Médio (VCM), Hemoglobina Corpuscular Média (HCM), Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média (CHCM) e leucograma).
Para a realização do hemograma, foi recolhida uma amostra de sangue periférico para um tubo de EDTA e analisada por um equipamento automático BC – 5000Vet da Mindray®. Para a medição do lactato, foi utilizado o restante sangue na agulha na tira de teste BM- Lactate da Roche®, previamente colocada no aparelho de medição rápida Accutrend® Plus.
Note-se que nenhuma amostra de sangue foi recolhida unicamente para a medição do lactato, mas sim para a realização do hemograma de controlo, de forma a respeitar o bem estar animal, causando o mínimo de stress e incómodo.
3. Parâmetros em Análise
Os parâmetros em análise incluíram a caracterização da amostra em relação à espécie, género, raça, idade, peso, tipo de neoplasia diagnosticada, presença ou não de metástases e a sua localização, a classificação dos efeitos secundários e descrição dos efeitos hematopoiéticos e gastrointestinais. Todos estes parâmetros foram recolhidos em diferentes momentos (L0, L1, L2 e L3), sendo que L0 representa o primeiro momento em que foram feitas as análises, antes de qualquer administração terapêutica. Os restantes momentos seguiram-se consoante o protocolo quimioterápico de cada indivíduo.
4. Análise Estatística
Os dados recolhidos durante a realização do estudo foram registados e organizados no programa Microssoft Office Excell (Microsoft Office® 2011 for Mac). A análise estatística foi realizada no software R®, na versão 3.0.1 e na sua extensão R Commander. Foi também utilizado o teste estatístico ANOVA a um factor. Este teste permitiu determinar a existência de diferença estatisticamente significativa entre os grupos (linfoma, carcinoma, hemangiossarcoma e outros) e foi utilizado para determinar se o lactato apresentava diferenças estatisticamente significativas entre os grupos a cada momento (L0, L1, L2 e L3). Considerou-se que existe diferença estatisticamente significativa, quando o valor de p<0,05 e que não existe quando p>0,05.
A análise estatística dos dados iniciou-se com o cálculo das características da amostra de cada grupo (média, desvio padrão, máximo, mínimo e mediana) para a variável em estudo, o lactato plasmático.
5. Resultados
5.1. Caracterização da amostra
No estudo apresentado, todos os indivíduos constituintes da amostra (n= 13) foram submetidos à mesma metodologia, que envolveu a avaliação dos níveis de lactato plasmático em vários tempos (L0, L1, L2 e L3).
A amostra incluiu um total de 13 animais, 10 eram da espécie canina (7 machos e 3 fêmeas) e 3 pertenciam à espécie felina (1 macho e 2 fêmeas).
A média de idades da amostra foi de 9,9 anos (mínimo de 2 e máximo de 15 anos de idade), sendo que a média de idades da espécie canina foi de 9,1 anos (mínimo de 2 e máximo de 13 anos) e a média da espécie felina foi de 12,7 anos (mínimo 10 e máximo de 15 anos).
Grupos La ct at o mmo l/L 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
Carcinoma Hemangiossarcoma Linfoma Outros
Quanto ao peso, os valores variaram entre 3,4 kg a 53,0 kg, com uma média de 19,5 kg. A espécie canina com média de 25,4 kg e a espécie felina com média de 4,9 kg.
Relativamente à raça, 8 dos animais eram de raça (8 cães, 0 gatos) e 5 dos restantes eram de raça indefinida (2 cães, 3 gatos). Nenhum gato do estudo era de raça definida.
5.2. Características amostrais dos parâmetros analisados
5.2.1. Apresentação dos resultados por grupos
Em média, os valores de concentração plasmática de lactato diferiram entre os diferentes grupos em estudo, ao longo das várias medições, estes apresentaram diferença estatisticamente significativa (p<0,05), p=0,00126 (Gráfico 1.)
Análise de cada grupo, individualmente, ao longo das várias medições:
1) O grupo Carcinoma, em média, apresentou valores de concentração plasmática de lactato, dentro do intervalo normal, excepto em L3, onde mostrou hiperlactacidemia ligeira (Tabela nº 7). Os valores foram aumentando ao longo das sessões de quimioterapia, mas, em geral, mantiveram-se dentro da normolactémia (Gráfico nº 2);
2) O grupo Hemangiossarcoma, em média, manteve sempre os valores de lactato dentro do intervalo normal (Tabela nº 8) (Gráfico nº 3);
3) O grupo Linfoma, após a primeira sessão de quimioterapia (L0), em média, apresentou
Carcinoma Medições La ct at o mmo l/L 2.0 2.5 3.0 3.5 L0 L1 L2 L3
valores de concentração plasmática de lactato, acima dos valores normais, verificando-se até hiperlactacidemia grave (> 7 mmol/L) em L1 (Tabela nº 9) (Gráfico nº 4);
4) O grupo Outros, em média, também mostrou valores dentro do intervalo normal (Tabela nº 10) (Gráfico nº 5).
Tabela 7. Características amostrais para lactato plasmático – Carcinoma
Carcinoma Lactato (mmol/L)
Tempo Média Desvio Padrão Máximo Mínimo Mediana
L0 2,4 0,76 3,6 1,9 2,5
L1 2,3 1,06 3,6 1,3 2,3
L2 2,6 0,4 3,3 2,3 2,5
L3 3,1 1,0 4,6 2,4 2,7
Tabela 8. Características amostrais para lactato plasmático – Hemangiossarcoma
Hemangiossarcoma Lactato (mmol/L)
Tempo Média Desvio Padrão Máximo Mínimo Mediana
L0 1,7 1,7 1,7 1,7 1,7
L1 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8
L2 2,5 1,2 3,4 1,6 2,5
L3 1,8 0,5 2,2 1,5 1,8
Tabela 9. Características amostrais para lactato plasmático – Linfoma