3 Column design according to Eurocodes
3.3 Ultimate limit state (ULS)
3.3.5 Buckling resistance of a column towards compression
A atividade miotóxica induzida por peçonhas de B. erythromelas e B. jararaca (Figuras 21A e 21B, respectivamente), foi avaliada no tempo de três horas após o protocolo de pré-tratamento com o extrato. Todas as doses inibiram a atividade miotóxica induzidas por ambas as peçonhas significativamente (p < 0,05) com todas as doses testadas.
Figura 21: Inibição da atividade miotóxica das peçonhas de B. erythromelas e B. jararaca, com o extrato de J. mollissima
(A) B. erythromelas e B) B. jararaca
Inibição da miotoxicidade induzida pelas peçonhas de (Ber) B. erythromelas e (Bja) B. jararaca com o extrato aquoso das folhas de Jm (J. mollissima) (50, 100 e 200 mg/Kg, i.p.) e (Dexa) dexametasona (2 mg/Kg, i.p.). Valores expressos como média ± erro médio padrão com n=5. *p < 0,05, **p < 0,01 e ***p < 0,001 quando comparados ao grupo controle (injeção das peçonhas), após teste de Tukey (ANOVA).
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6 DISCUSSÃO
É importante se estudar os extratos obtidos a partir de plantas, em especial J. mollissima, uma vez que o conhecimento popular indica uma série de usos possíveis e alguns estudos farmacológicos já vêm demonstrado a veracidade de seus usos tradicionais (ABREU et al., 2003; MARIZ, 2007; LEAL; AGRA, 2005; VEIGA, 2008). Com relação ao uso como antiofídico dessa espécie, no entanto, há escassez de trabalhos com este enfoque, o que impulsionou o estudo dessa planta nesse trabalho. A carência dos estudos fitoquímicos sistematizados, que revelem as principais classes de constituintes e compostos majoritários presentes em extratos de folhas de J. mollissima, ainda não publicado, torna difícil o controle de qualidade do extrato preparado em virtude da falta de padrões de referência.
A partir da análise por CCD e a co-CCD sugere-se a presença dos flavonóides como compostos majoritários, a julgar pelo número, intensidade e tamanho das manchas quando reveladas com Reagente A Natural. Por meio do CLAE, quatro compostos tiveram sua presença confirmada como sendo a isoorientina, orientina, vitexina e isovitexina.
Segundo Veiga (2008), os flavonóides podem ser considerados os compostos majoritários das folhas de J. gossypiifolia, podendo servir como indicadores de controle de qualidade. Tal observação também foi feita de acordo com os resultados obtidos nesse estudo, onde se encontrou um perfil cromatográfico de J. mollissima semelhante por CCD. Estudos mostram que vários flavonóides inibem as fosfolipases e hialuronidases das peçonhas ofídicas, possuem potente atividade quelante com os metais e que o flavonóide luteolina apresentou atividade antiofídica, ao inibir hialuronidases da peçonha da serpente Crotalus adamenteus (CARVALHO et al., 2013; MORS et al., 2000; SANTHOSH et al., 2013). A presença desses possíveis flavonóides no extrato de J. mollissima e a possibilidade de serem analisados in vivo em busca de sua atividade antiofídicas é de extrema importante, uma vez que iria ajudar a complementar a soroterapia, principalmente nas regiões onde a soroterapia é quase nula.
A inibição da atividade edmatogênica foi avaliada, e observou-se que o extrato das folhas de J. mollissima inibiu o efeito edematogênico induzido tanto pela peçonha de B. erythromelas como do B. jararaca após 120 minutos, como observado nas Figuras 14A e B. Várias toxinas podem ser responsáveis pelo efeito edematogênico produzido pela peçonha botrópica entre elas as fosfolipases A2 e as metaloproteases hemorrágicas e não- hemorragicas. A literatura descreve que os sintomas locais (principalmente o edema), são mais difíceis de neutralizar isto porque as peçonhas botrópicas atuam rapidamente e muitos
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desses efeitos são causados por mediadores endógenos da resposta inflamatória liberado pelo tecido lesado, em resposta a lesão das peçonhas (GUTIÉRREZ et al., 1995; PICOLO et al., 2002)
Quanto à atividade anti-edematogênica apresentada pelo extrato de J. mollissima pode-se sugerir que o extrato apresenta atividade anti-inflamatória que reduz a inflamação provocada pelos mediadores químicos endógenos liberados pelas toxinas presentes nessas peçonhas. Estudos mostram que o gênero Jatropha apresenta atividade anti-edematogênica e isso foi comprovado por um dos trabalhos desenvolvidos pelo nosso grupo de pesquisa, que mostrou que o extrato das folhas de J. gossypiifolia reduziu o edema de pata induzido por B. jararaca, nas mesma doses utilizadas no presente trabalho (FÉLIX-SILVA, 2014).
Após a formação de edema, a reação local subsequente é o recrutamento de leucócitos circulantes – neutrófilos, eosinófilos, linfócitos e monócitos – que migram, seletivamente, para o local da inflamação (ALBELDA et al., 1994; ZAMUNER; TEIXEIRA, 2003). No início da resposta inflamatória aguda, há acúmulo predominantemente de neutrófilos. Essas células representam a primeira linha de defesa no organismo e apresentam uma capacidade fagocítica para a eliminição do agente agressor alta. Nas fases mais tardias da resposta inflamatória, são observadas as células mononucleares (KUMAR et al., 2008)
No presente estudo, foi avaliada a capacidade do extrato aquoso das folhas de J. mollissima em inibir a migração leucocitária para a cavidade peritoneal induzida pelas peçonhas de B. erythromelas e B. jararaca. Os resultados demonstraram que o extrato foi capaz de reduzir significativamente a migração celular induzida por ambas as peçonhas em todas as doses testadas (Figuras 15A e B). O presente estudo demonstra ainda, que o extrato aquoso de J. mollissima também reduziu significativamente o número das células mononucleares e polimorfonucleares que migraram para a cavidade peritoneal induzida pela peçonha de B. erythromelas e B. jararaca em todas as doses testadas (Figuras 16A e B).
Estudos anteriores mostram que as metaloproteases presente na peçonha de B. asper, quando injetado na cavidade peritoneal de camundongos induziu um aumento dos níveis de IL-1, acompanhado de aumento da expressão de moléculas de adesão de leucócitos. Essas metaloproteases também são responsáveis pela ativação do sistema complemento, resultando em um aumento de migração celular (TEIXEIRA et al., 2003). Segundo Farsky et al., (1997) o sistema complemento também é ativado pela peçonha de B. jararaca possivelmente pela ação de metaloproteases. Além de possuir as metaloproteases, a peçonha de Bothrops possui atividade das fosfolipases A2 que são importantes para a indução da migração de leucócitos,
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provavelmente por induzir de forma mais potente a indução de mediadores importantes para a migração. Isto se dá devido à fosfolipases A2 Asp49 que são mais potentes que as fosfolipazes Lys49 em induzir mediadores inflamatórios como a IL-1, IL-6, TNF-α além de ativar moléculas de adesão importantes para a migração das células (CASTRO et al., 2000; ZULIANI et al., 2005). Por outro lado, estudos mostram que produtos derivado da via de lipoxigenase participam da migração induzida pelas peçonhas B. erythromelas e B. alternatus (FLORES et al, 1993). Outro achado importante em acidentes causados pelas serpentes botrópicas é a hemorragia local produzida pela ação de metaloproteases hemorrágicas (GUTIÉRREZ; LOMONTE, 1989; ESCALANTE et al., 2011). Como observado na Figura 20, o extrato foi capaz de inibir a hemorragia causada pela peçonha de B. jararaca nas três doses testadas. Através do aspecto morfológico dos halos hemorrágicos, pode-se observar que houve uma diminuição da hemorragia consoante o aumento da dose do extrato. Sendo assim, sugere-se que o extrato aquoso possa estar inibindo a ação das metaloproteases hemorrágicas. O dano do tecido muscular, que pode muitas vezes levar a perda definitiva de tecido e consequentemente a amputação do membro, devido à ação direta da fosfolipases A2 ou das metaloproteases (ação indireta). Após a lesão muscular, a perda desordenada do íon cálcio, causa a ruptura da membrana celular liberando desta forma, marcadores citosólicos (GUTIÉRREZ; LOMONTE, 1989). O extrato foi capaz de inibir os níveis de creatina quinase (um dos marcadores citosólicos) de ambas as peçonhas em estudo o que mostra que possivelmente o extrato esteja inibindo a ação dessas toxinas.
É possível sugerir que possivelmente o extrato aquoso das folhas de J. mollissima possuem substâncias capazes de inibir direta ou indiretamente as toxinas presentes nas peçonhas de B. erythromelas e B. jararaca. Os resultados obtidos mostram que o extrato aquoso de J. mollissima possui potencial ação contra os efeitos locais causado por serpentes botrópicas.
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7 CONCLUSÕES
Por meio do CLAE quatro compostos tiveram sua presença confirmada como sendo a isoorientina, orientina, vitexina e isovitexina.
O extrato aquoso das folhas de J. mollissima nas doses 50, 100 e 200 mg/kg, administrado por via intraperitoneal, apresentou atividade anti-edematogênica frente ao edema de pata induzido por B. erythromelas e B. jararaca. J. mollissima revelou um efeito anti-edematogênico estatisticamente semelhante ao efeito induzido pela dexametasona (p > 0,05), o que mostra a potencialidade do extrato como anti- inflamatório.
O extrato aquoso das folhas de J. mollissima nas doses 50, 100 e 200 mg/kg, administrado por via intraperitoneal, promoveu a inibição da migração celular induzido por B. erythromelas e B. jararaca (p < 0,05).
O extrato aquoso das folhas de J. mollissima nas doses 50, 100 e 200 mg/kg, administrado por via intraperitoneal, promoveu a inibição das células mononucleares e das células polimorfonucleares induzidos por B. erythromelas (p < 0,05).
O extrato aquoso das folhas de J. mollissima nas doses 50, 100 e 200 mg/kg, administrado por via intraperitoneal, promoveu a inibição da atividade hemorrágica induzidos por B. jararca (p < 0,05).
O extrato aquoso das folhas de J. mollissima nas doses 50, 100 e 200 mg/kg, administrado por via intraperitoneal, promoveu a inibição da atividade miotóxica induzido por B. erythromelas e B. jararaca (p < 0,05).
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