Økonomisk handlingsrom?

60 Aproximadamente 230 milhões de infecções anuais, 25.000 casos fatais e cerca de 3,6 bilhões de pessoas sobre o risco iminente de infecção em todo o mundo. (WILDER- SMITH et al., 2012a-b). Uma média de 2.1 bilhões de dólares gastos por ano nas Américas (SHEPARD et al., 2011) e 950 milhões no sudoeste asiático (SHEPARD et al., 2013) Apesar disso, ainda não existem vacinas disponíveis. O tratamento sintomático apropriado é a opção de escolha e determinante para a redução no número de casos graves que podem evoluir para o óbito (WHITEHEAD et al., 2011). O principal meio de prevenção é o controle do mosquito vetor, um método dispendioso e geralmente ineficaz, como pode ser comprovado pela expansão do número de casos ocorridos nas ultimas décadas. (MURPHY & WHITEHEAD, 2011; FAGUNDES et al., 2011; COSTA et al., 2013; ST JOHN et al., 2013).

Como discutido anteriormente, uma resposta inflamatória exacerbada durante a infecção pelo vírus da dengue para impactar diretamente no hospedeiro favorecendo o desenvolvimento dos quadros mais graves (FHD/SCD), ao passo que uma resposta adequada, está associada aos quadros mais brandos da doença (FD) (GARCIA et al., 2010; FAGUNDES et al., 2011; COSTA et al., 2013). Nesse sentido, estudos direcionados a compreender os mecanismos associados ao desenvolvimento da doença grave e aqueles associados à proteção do hospedeiro frente à infecção são necessários e bastante relevantes, principalmente no que diz respeito ao desenvolvimento de novas terapias contra esse importante patógeno humano.

Ainda, apesar do avanço no conhecimento dos mecanismos da resposta imune inata, pouco conhecimento há disponível, sobre a participação de receptores do tipo toll9 e dos mediadores que são gerados pela sua sinalização durante a dengue, tampouco

61 os mecanismos que desencadeiam a sua ativação durante a doença e sua relação com a morte celular.

Além disso, já é demonstrado que citocinas como IFN-γ contribuem para a resistência do hospedeiro, em parte pela indução de NOS2 (FAGUNDES et al., 2011; COSTA et al., 2012). Por outro lado, a resposta desencadeada por IFN-γ parece contemplar outros fatores até então desconhecidos durante a dengue como a geração de O2·- e ONOO-, tornando-se assim necessário o entendimento mais amplo destes

mecanismos de forma mais abrangente.

Assim, o objetivo geral deste trabalho foi estudar os mecanismos de ativação e a participação de receptores do tipo toll9 e avaliar os mecanismos de indução e a participação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio durante a dengue.

Mais especificamente, o trabalho aqui exposto contemplou os seguintes objetivos:

2.1.Objetivo específico I

Avaliar a liberação de mediadores inflamatórios e a liberação de produtos derivados de morte celular em pacientes com diagnóstico confirmado de dengue clássica e pacientes febris de origem multifatorial.

· Avaliar a produção de IL-1β, PTX3, sTNFR1 e sTNFR2 no soro de pacientes com diagnóstico de dengue confirmado e de pacientes febris de origem multifatorial correlacionando os achados aos dias de sintoma da doença.

· Avaliar a produção de IL-6, TNF-α, IL-10 e IL-4 em sobrenadante de cultura de PMBCs de pacientes com diagnóstico de dengue confirmado e de indivíduos saudáveis após estimulação com proteína E viral.

62 · Avaliar os níveis de DNA mitocondrial no soro de pacientes com diagnóstico de dengue confirmado e de pacientes febris de origem multifatorial correlacionando os achados aos dias de sintoma da doença.

2.2.Objetivo específico II

Avaliar os mecanismos de ativação e a participação de receptores do tipo toll9 durante a dengue experimental em camundongos.

· Avaliar os níveis de DNA mitocondrial livre no soro de camundongos após a infecção pelo DENV-3;

· Verificar a participação de TLR9 durante a dengue experimental através da análise dos parâmetros de doença e medida dos níveis de citocinas e espécies reativas em animais TLR9-/- infectados com DENV-3;

2.3. Objetivo específico III

Avaliar o mecanismo de indução e a participação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio durante a dengue experimental em camundongos.

· Determinar os níveis de ROS e ONOO- e da expressão de gp91phox durante a dengue experimental através do uso de técnica de marcação por fluorimetria e Real Time PCR, respectivamente, em esplenócitos isolados de camundongos infectados com DENV-3;

· Verificar a participação do complexo NADPH-oxidase e da produção de ROS por essa via durante a dengue experimental através da análise dos parâmetros de doença e medida dos níveis de citocinas e espécies reativas em camundongos gp91phox-/- ou tratados com Apocinina e infectados com DENV-3;

63 · Verificar o papel da citocina IFN-γ no controle da expressão de gp91phox e na regulação da geração de ROS e ONOO- durante a dengue experimental através do uso de técnica de marcação por fluorimetria e Real Time PCR, respectivamente, em esplenócitos isolados de camundongos IFN-γ-/- infectados com DENV-3;

· Estudar o efeito da ação sinérgica de NO e superóxido durante a dengue experimental através da análise dos parâmetros de doença e medida dos níveis de citocinas e espécies reativas em camundongos NOS2-/- tratados com Apocinina e infectados com DENV-3;

· Estudar o efeito da decomposição rápida de ONOO- durante a dengue experimental através da análise dos parâmetros de doença e medida dos níveis de citocinas e espécies reativas em camundongos selvagens tratados com FeTPPs e infectados com DENV-3;

2.4. Objetivo específico IV

Avaliar a capacidade antiviral do Peroxinitrito em cultura de células LLC-MK2 infectadas com DENV-3.

· Estudar o efeito do ONOO- com agente antiviral através do uso de SIN-1, um doador de ONOO-, em células LLC-MK2 infectadas om DENV-3 e posterior análise da carga viral pela técnica de titulação.

64