Turistene kommer

Para determinação da seletividade foi avaliada a interferência do diluente, fase móvel e dos componentes da formulação (placebo) no tempo de retenção do fármaco. Foi realizado também o estudo com amostras estressadas sob condições ácidas, básicas, oxidativas e fotólicas (luz branca e UV), para verificar a possível interferência de produtos de degradação.

Foi realizada também análise de pureza de pico para comprovar que o pico cromatográfico obtido era atribuído apenas ao fármaco.

2.3.1.1 Procedimento

Foram preparadas amostras da substância de referência fumarato de tenofovir desoproxila Nortec (lote SQR 907049), padrão de trabalho de fumarato de tenofovir desoproxila (matéria-prima lote 907049), placebo 100% fortificado com fumarato de tenofovir desoproxila, placebo puro, diluente (solução trietilamina 0,1% pH 5,3) e fase móvel [solução trietilamina 0,1% pH 5,3 : metanol (grau CLAE) (55:45)].

As amostras da substância de referência Nortec, do padrão de trabalho e do placebo fortificado foram preparadas a uma concentração de 0,30 mg/mL de fumarato de tenofovir desoproxila. As amostras do placebo fortificado e do placebo puro foram preparadas a uma concentração de 0,37 mg/mL de placebo.

No preparo da amostra da substância de referência Nortec, foram pesados 75 mg da substância e transferidos para balão de 25 mL com auxílio de 15 mL de solução diluente.

No preparo da amostra de padrão de trabalho, foram pesados 150,00 mg da substância, os quais foram transferidos para um balão volumétrico de 50 mL, com auxílio de 35 mL de solução diluente.

55 No preparo do placebo fortificado 100%, foram pesados 184,00 mg do placebo puro e 150,00 mg padrão de trabalho, os quais forma, em seguida, transferidos para um balão volumétrico de 50 mL, com auxílio de 35 mL de solução diluente.

No preparo do placebo foram pesados 184,00 mg e transferidos para um balão volumétrico de 50 mL, com auxílio de 35 mL de solução diluente.

Todas as amostras foram submetidas a 10 minutos em agitador orbital e 10 minutos em banho ultra-som (temperatura ambiente). O volume foi completado com solução diluente e homogeneizado. Procedeu-se a diluição de 10 mL para balão de 100 mL, completando o volume do balão com solução diluente. A solução final foi filtrada para vial.

2.3.1.2 Estudo das amostras sob condições de estresse

De acordo com Informe Técnico nº 1, de 15 de julho de 2008, divulgado pela Anvisa, o objetivo do teste é promover uma degradação de pequena extensão (10- 30%) do fármaco.

Os estudos de estresse são recomendados também pelo guia Q1A(R2) da Conferência Internacional em Harmonização (ICH), uma vez que a avaliação de produtos de degradação sob condições de estresse é bastante útil no desenvolvimento e validação de métodos analíticos adequados (ICH, 2003).

Foram realizados testes de degradação forçada em condições ácidas (HCl 0,1 M e 1 M), básicas (NaOH 0,1M e 1 M) e oxidativas (H2O2 a 3% v/v), sendo as condições iniciais de estresse com utilização de solução, com e sem aquecimento. As condições iniciais aplicadas não geraram os perfis de degradação desejados, desta forma foram aplicadas outras condições descritas no item 2.4.1.1.

Para as amostras do fármaco foram pesados 150,0 mg e transferidos para balão volumétrico de 100 mL com auxílio de 25 mL de solução diluente. Submeteu- se a 10 minutos em agitador orbital e 10 minutos em banho ultrassom (temperatura ambiente). O volume foi completado com cada umas das soluções de estresse: HCl 0,1 M ou HCl 1 M ou NaOH 0,1 M ou NaOH 1 M ou H2O2 3% e homogeneizado. As soluções com cada uma das condições foram divididas em dois volumes de 50 mL sendo que um deles foi submetido a aquecimento em banho-maria a 60°C por 6

56 horas (o frasco foi tampado com auxílio de parafilme para evitar evaporação da solução). Em seguida, procedeu-se a diluição de 10 mL para balão de 50 mL, completando o volume do balão com solução diluente. A solução final foi filtrada para vial.

Para as amostras do placebo puro foram pesados 184,0 mg e seguido o mesmo procedimento relatado acima.

Para as amostras do produto acabado (comprimidos revestidos) foram triturados 20 comprimidos e pesou-se o equivalente a ½ peso médio (334 mg), equivalente a 150 mg de fumarato de tenofovir desoproxila e seguiu-se o mesmo procedimento relatado anteriormente.

2.3.1.3 Estudo das amostras sob condições de fotólise

Amostras de matéria-prima (lote 907049), placebo puro (021RD_09T12PL) e produto acabado (comprimidos revestidos dos lotes 09080843, 09080844 e 09080845) foram analisadas.

Para o produto acabado foram avaliadas amostras de comprimidos, comprimidos armazenados em frascos (embalagem primária) e frascos armazenados em caixas (embalagem secundária). O objetivo foi avaliar a proteção contra a luz das embalagens do produto acabado.

O estudo foi conduzido em câmara para fotoestabilidade, com fonte de luz conforme a opção 2 do guia Q1B do ICH, contendo prateleiras separadas com lâmpada branca fluorescente fria similar à ISO 10977 (1993) e lâmpada fluorescente UV com espectro distribuído entre 320 nm e 400 nm, e emissão máxima de energia entre 350 nm e 370 nm (ICH, 1996).

As condições de temperatura e umidade foram padronizadas para o estudo em 25ºC ± 2°C e 60% ± 5% de umidade relativa (UR). A exposição das amostras foi de no mínimo 1,2 Klux x hora para luz branca, e no mínimo 200 watt horas/m2 para luz ultravioleta.

As amostras da matéria-prima e do placebo foram colocadas em placas de petri em quantidade suficiente para formar uma fina camada cobrindo todo o fundo da placa. As amostras de comprimidos também foram colocadas em placas de petri distribuídas sem sobreposição.

57 Após finalizado o teste, as amostras foram retiradas da câmara e o aspecto observado. No preparo da amostra do fármaco e do placebo foram pesados 150,0 mg e 184,0 mg, respectivamente. Os quantitativos pesados foram transferidos para balões volumétricos de 100 mL com auxílio de 25 mL de solução diluente. Submeteu-se a 10 minutos em agitador orbital e 10 minutos em banho ultrassom (temperatura ambiente). O volume foi completado com solução diluente e homogeneizado. Procedeu-se a diluição de 10 mL para balão de 50 mL, completando o volume do balão com solução diluente. A solução final foi filtrada para vial.

Para as amostras do produto acabado (comprimidos revestidos) foram triturados 10 comprimidos e pesados o equivalente a ½ peso médio (334 mg), equivalente a 150 mg de fumarato de tenofovir desoproxila e seguiu-se o mesmo procedimento relatado acima.