Gingivectomy

O carbono orgânico total (COT) da TFSA foi determinado em três repetições pela titulação do dicromato de potássio remanescente com sulfato ferroso amoniacal após o processo de oxidação por via úmida (YEOMANS & BREMNER, 1988). Neste método adicionou-se 5 mL de dicromato de potássio 0,167 mol L-1 e 7,5 mL de H2SO4

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à, aproximadamente, 0,5 g de amostra contida em tubo de digestão procedendo-se com o aquecimento em bloco digestor a 170 °C por trinta minutos. Em seguida foi feita a transferência quantitativa do volume do tubo para erlenmeyer utilizando-se água destilada até obenção de um volume aproximado de 80 mL. Adiconaram-se 0,3 mL da solução indicadora de ferroin, obtida pela dissolução de 1,485 g de o-fenantrolina e 0,695 g de FeSO4.7H2O em 100 mL de água destilada. Posteriormente foi feita a

determinação do carbono pela titulação com solução de sulfato ferroso amoniacal que consistiu na solução de 156,8 g de Fe(NH4)2.6H2O com 100 mL de H2SO4 concentrado

completando-se com água destilada um balão volumétrico de 2.000 mL.

3.3.3.2. Nitrogênio total

O nitrogênio total foi determinado pelo método desenvolvido por Kjeldahl em 1883 (BREMNER & MULVANEY, 1982; TEDESCO et al., 1995), que consiste de duas etapas: digestão sulfúrica e destilação. Para isso pesou-se 0,5 g de solo moído e passado em malha de 0,2 mm em tubo de digestão. Em seguida, adicionaram-se 2,0 mL de H2SO4 concentrado e 0,7 g de mistura digestora (1 g de selênio metálico, 10 g de

CuSO4.5H2O e 100 g de NaSO4, moídos e homogeneizados). Estes tubos foram, então,

levados ao bloco digestor elevando-se gradualmente a temperatura até 375 °C, permanecendo por aproximadamente 2 horas em digestão. Após esfriar foi realizada a destilação do nitrogênio com a adição de 15 mL de NaOH 10 mol L-1 e coleta do volume destilado em erlenmeyer contendo 5 mL de solução indicadora de ácido bórico. Esta solução foi preparada em três etapas: a primeira etapa consistiu da dissolução de 0,660 g de verde de bromocresol e 0,330 g de vermelho de metila em 1.000 mL de etanol 95 %. Na segunda etapa realizou-se preparo da solução indicadora seguindo-se pela dissolução de 40 g de ácido bórico em aproximadamente 1.400 mL de água destilada quente, que após esfriar procedeu-se com a terceira etapa do preparo na qual esta solução foi transferida para balão volumétrico de 2.000 mL onde foram adicionados 40 mL da solução de verde de bromocresol e vermelho de metila, anteriormente preparada e em seguida completou-se o volume do balão com água destilada. A solução então contida no erlenmeyer foi titulada com HCl 0,005 mol L-1.

25 3.3.3.3. Fracionamento de substâncias húmicas

As diferentes frações foram obtidas pela separação por diferença de solubilidade em meio ácido e alcalino pelo método sugerido pela International Humic Substances Society (SWIFT, 1996).

A fração humina foi separada das frações ácido húmico e ácido fúlvico agitando- se verticalmente tubos de centrífuga de 50 mL contendo 1,0 g de TFSA moída e passada em peneira de 0,20 mm com 10 mL de NaOH 0,1 mol L-1 por 1 h. Em seguida as amostras permaneceram em repouso por doze horas e foram centrifugadas a 3.000 g por 20 minutos. Novamente, foram adicionados 10 mL de NaOH nos tubos que foram agitados manualmente e deixados em repouso por uma hora até que foram centrifugados a 3.000 g. Este último procedimento foi realizado mais uma vez. Os resíduos nos tubos contendo a fração humina foram secos a 45 °C. O extrato alcalino teve o pH aferido em 2,0 com solução de H2SO4 a 20 % e ficou em repouso por 12 h para precipitação da

fração ácidos húmicos. Procedeu-se a centrifugação a 3.000 g por 5 minutos e recolheu- se o sobrenadante contendo a fração ácidos fúlvicos, que teve o volume aferido para 50 mL. O resíduo no tubo (fração ácidos húmicos) foi resuspendido com NaOH 0,1 mol L-1 e o volume completado para 50 mL.

O carbono orgânico das frações foi determinado pelo processo de oxidação via úmida (YEOMANS & BREMNER, 1988) e o nitrogênio total pelo método de Kjeldahl (BREMNER & MULVANEY, 1982; TEDESCO et al., 1995).

3.3.3.4. Matéria orgânica leve em água (MOL)

Após a dispersão de 50,0 g de amostra com 100 mL de NaOH 0,1 mol L-1 em repouso durante uma noite, o material foi agitado e passado em peneira de 0,25 mm, eliminando-se as frações silte e areia fina. O resíduo foi recolhido e a MOL foi separada da fração mineral por flotação até que todo o material fosse coletado e transferido para recipientes previamente tarados. Posteriormente, o material foi seco em estufa a 65 °C por, aproximadamente, 72 h e todo o conjunto foi pesado.

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A determinação da MOL foi feita por diferença de peso: [(lata + MOL) – lata] (ANDERSON & INGRAM, 1989).

Para a quantificação do carbono e nitrogênio as amostras foram moídas em almofariz de ágata e passadas em peneira com malha de 0,150 mm. Em seguida foram secas em estufa de circulação de ar por 48 horas a 55 °C e, posteriormente, armazenadas em dessecador. A quantificação do C, N e H foi realizada por combustão a seco em analisador elementar (CHNS, Perkin Elmer, Optima 2400).

3.3.3.5. Ácidos orgânicos de baixa massa molecular (AOBMM)

Foi realizada a extração dos ácidos orgânicos de baixa massa molecular em 2,5 g de TFSA dos horizontes A e espódicos dos perfis. A TFSA foi moída almofariz de ágata e passada em peneira com malha de 0,150 mm à qual se adicionaram 5 mL de NaOH 0,1 mol L-1. Agitou-se a suspensão por 1 hora a 150 rpm a 4 °C, centrifugando-a a 3000 g por 15 minutos também a 4 °C. Em seguida, uma alíquota de 1 mL do sobrenadante foi centrifugada a 14.000 g por 15 minutos e, então, filtrada em filtro de membrana com poros de 0,45 μm. A separação dos AOBMM foi realizada por cromatografia iônica (SILVA et al., 2001; PEGORARO et al., 2005). Utilizou-se uma coluna analítica AS-11 (25 x 4,0 mm) equipada com coluna guarda AG-11 e “trap” de ânions ATC-4. Utilizou- se um gradiente de NaOH e metanol, em um fluxo de 1,0 mL min-1. A detecção foi feita por condutividade elétrica suprimida por meio de detector eletroquímico. Para algumas amostras selecionadas também foi feita detecção simultânea com um detector de arranjo de diodos.