Qualitative content analysis of narratives

Para análise dos polimorfismos A35C e G2809A no gene SOD1 padronizou-se a técnica de PCR-RFLP. Verificou-se a amplificação de amplicons com tamanhos previstos de 173 pb (A35C) e 221 pb (G2809A) com ausência de contaminação nas reações de PCR (Figuras 5 e 6).

A Figura 7 apresenta o padrão de restrição de amplicons do gene SOD1 com a enzima HhaI. O SNP A35C resulta na substituição de uma adenina por uma citosina na posição 35 do gene da SOD1. A presença de um único fragmento de 173 pb indica genótipo homozigoto de referência para o SNP. A presença de três fragmentos, um de 173 pb, e outros dois de 105 pb e 68 pb, indica genótipo heterozigoto. A presença de dois fragmentos, um de 105 pb e outro de 68 pb indicaria genótipo homozigoto polimórfico.

A Figura 8 apresenta o padrão de restrição de amplicons do gene SOD1 com a enzima. Cac8I. O SNP G2809A resulta na substituição de uma guanina por uma adenina na posição 2809 do gene da SOD1. A presença de um único fragmento de 221 pb indica genótipo homozigoto polimórfico para o SNP. A presença de três fragmentos, um de 221 pb, e outros dois de 163 pb e 58 pb, indica genótipo heterozigoto. A presença de dois fragmentos, um de 163 pb e outro de 58 pb indica genótipo homozigoto de referência.

Figura 5. Gel de agarose (1%) corado em brometo de etídio que apresenta amplificação de fragmento de 173 pb correspondente ao amplicon do gene SOD1 contendo o SNP A35C. M: marcador de 100 pb; 1, 2, 3, 4 e 5 fragmento amplificado (FA) de 173 pb; 6 e 7: controles negativos (CN).

Marcador

de 100 pb FA CN

173 pb

Figura 6. Gel de agarose (1%) corado em brometo de etídio que apresenta amplificação do fragmento de 221 pb correspondente ao amplicon do gene da SOD1 contendo o SNP G2809A. M: marcador de 100 pb; 1, 2, 3, 4 e 5 fragmento amplificado (FA) de 221 pb; 6 e 7: controles negativos (CN). 221 pb Marcador de 100 pb FA CN M 1 2 3 4 5 6 7

Figura 7. Gel de agarose (2%) corado com gel red que apresenta o padrão de restrição de amplicon do gene SOD1 com a enzima HhaI. M: marcador de 50 pb; 1 e 2: a presença de fragmentos de 173 pb e 105 pb indica genótipo heterozigoto (AC) para o polimorfismo A35C (o fragmento previsto de 68 pb não foi visualizado no gel); 3 a 11: a presença de um único fragmento de 173 pb indica genótipo homozigoto de referência (AA) para o polimorfismo A35C.

M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Marcador de 50 pb AC AC AA 173 pb 105 pb

GG GG GA GA GA GA AA Marcador 50 pb

Figura 8. Gel de agarose 2% corado com gel red que apresenta o padrão de restrição de amplicon do gene SOD1 com a enzima Cac8I. M: marcador de 50 pb; 1 e 2: a presença de fragmentos de 163 pb e 58 pb indica genótipo homozigoto de referência (GG) para o polimorfismo G2809A; 3, 4, 5 e 6: a presença de fragmentos de 221 pb, 163 pb e 58 pb indica genótipo heterozigoto (GA); 7: a presença de um única fragmento de 221 pb indica genótipo homozigoto polimórfico (AA) para o polimorfismo G2809A.

1 2 3 M 4 5 6 7

221 pb 163 pb

Todos os indivíduos classificados como homozigotos para o polimorfismo G2809A no gene da SOD1, pela técnica de PCR-RFLP, tiveram seu genótipo confirmado por sequenciamento. No caso daqueles classificados como homozigotos de referência ou heterozigoto, 10% dos resultados foram confirmados também por sequenciamento. Houve 100% de concordância entre os resultados obtidos pelas 2 técnicas de genotipagem. As Figuras 9, 10 e 11 apresentam exemplos de eletroferogramas correspondentes aos genótipos homozigoto de referência, heterozigoto e homozigoto para o polimorfismo G2809A no gene da SOD1, respectivamente.

Figura 9. Eletroferograma correspondente a paciente com câncer de cavidade oral e orofaringe classificado como homozigoto de referência para o polimorfismo G2809A no gene da SOD1.

Figura 10. Eletroferograma correspondente a paciente com câncer de cavidade oral e orofaringe classificado como heterozigoto para o polimorfismo G2809A no gene da SOD1.

Figura 11. Eletroferograma correspondente a paciente com câncer de cavidade oral e orofaringe classificado como homozigoto polimórfico para o polimorfismo G2809A no gene da SOD1

A Tabela 2 apresenta a distribuição do genótipo para o polimorfismo SOD1 A35C no grupo caso, de pacientes com câncer epidermóide da cavidade oral e orofaringe.

De acordo com a Tabela 2 observou-se frequência reduzida do polimorfismo SOD 1 A35C. Dessa forma, optou-se por restringir essa análise apenas a 118 pacientes, visto que a análise da totalidade de casos (169) não deveria mudar o resultado obtido e seria insuficiente para se estimar associação entre o SNP em questão e o risco de câncer da cavidade oral e orofaringe.

A Tabela 3 apresenta a distribuição para o genótipo SOD1 G2809A nos grupos caso e controle.

Tabela 2. Distribuição da frequencia do SNP A35C no gene da SOD1 em indivíduos do grupo caso, atendidos no Hospital Heliópolis, (n;%).

Caso Polimorfismo Genótipo n (%) A35C AA 107 (91) AC 10 (8) CC 1 (1) AC + CC 11 (9) Total 118 (100)

Tabela 3. Distribuição do genótipo para o polimorfismo G2809A no gene da SOD1 de indivíduos dos grupos caso e controle, atendidos no Hospital Heliópolis, (n;%).

Genótipo Caso Controle Total OR* IC** p

n (%) n (%) n (%) 95% GG 111 (66) 113 (62) 224 (64) GA 49 (29) 61 (34) 110 (31) 1,09 0,710 - 1,689 AA 9 (5) 7 (4) 16 (5) 1,25 0,802 - 1,943 0,3633 GA e AA 58 (34) 68 (38) 126 (36) 1,25 0,801 - 1,947 0,1923 Total 169 (100) 181 (100) 350 (100)

De acordo com a Tabela 3 observou-se que não houve associação entre o polimorfismo SOD1 G2809A e o risco de desenvolvimento de câncer da cavidade oral e orofaringe, visto que a distribuição do polimorfismo entre os grupos não apresentou diferenças estatisticamente significante (p>0,05). A distribuição do genótipo nos grupos caso e controle esteve em equilíbrio de Hardy-Weinberg.

A Tabela 4 apresenta a distribuição do genótipo para o polimorfismo SOD1 G2809A nos grupos caso e controle, estratificados de acordo com a utilização de tabaco. Não se observou associação entre o SNP e o risco de câncer epidermóide da cavidade oral e orofaringe em pacientes que consumiam mais ou menos que 20 pack years.

Tabela 4. Distribuição do genótipo para o polimorfismo SOD1 G2809A nos grupos caso e controle, estratificados de acordo com a utilização de tabaco.

Tabagismo SOD1 G2809A Caso* Controle** OR*** IC**** p

(Pack year) n n 95%

≤ 20 GG 60 56

GA + AA 27 26 1,3975 0,7267 - 2,6877 0,2008

> 20 GG 48 37

GA + AA 26 34 1,2017 0,6332 - 2,2806 0,3452 *De um total de 169 indivíduos do grupo caso, 2 relataram nunca ter fumado e 6 não informaram a quantidade de utilização de tabaco. ** De um total de 181 indivíduos do grupo controle, 27 relataram nunca ter fumado e 1 não informou a quantidade de utilização do tabaco. ***Odds Ratio **** Intervalo de confiança

A Tabela 5 apresenta a distribuição do genótipo para o polimorfismo SOD1 G2809A nos grupos caso e controle, estratificados de acordo com a ingestão de álcool. Não se observou associação entre o SNP e o risco de câncer epidermóide da cavidade oral e orofaringe em pacientes que consumiam mais ou menos que 80 g de etanol por dia.

5.2 Estudo II

5.2.1 Variáveis sociais, demográficas e clínicas de pacientes com câncer da