A ativação dos receptores do tipo toll 4 (TLR4), causa dor aguda induzida por paclitaxel. Então foi avaliado se ativação desse receptor aumenta a expressão de citocinas ou quimiocinas em camundongos tratados com paclitaxel. Para isso foi administrado em camundongos TLR4-/- e em camundongos WT dose única de paclitaxel e foi verificado se à droga provocava aumento de IL-1β, TNF-α, IL-6, MCP-1 e KC/CXCL1 no plasma, nervo isquiático, gânglios da raiz dorsal e medula espinal nessa linhagem de camundongos, os valores estão representados nos gráficos 23, 24, 25 e 26.
6.11.1 Quantificação de citocinas e quimiocinas no plasma.
O tratamento com paclitaxel provocou aumento significativo (p<0,05) de IL-1β, TNF-α e IL-6 em camundongos WT tratados com paclitaxel quando comparados com o grupo naive (Gráficos 23A, 23B e 23C). Da mesma forma, foi observado aumento significativo (p<0,05) da quimiocina KC/CXCL1 (Gráfico 23D) quando comparados com o grupo naive.
Entretanto, nos camundongos TLR4-/- tratados com paclitaxel as concentrações de TNF-α, IL-6 e KC/CXCL1 encontraram-se moderadas, não sendo observado aumento significativo quando comparado ao grupo naive. E quando comparados ao grupo de camundongos WT tratados com paclitaxel, observa-se significativa redução (p<0,05) destas citocinas e quimiocina, quatro horas após a administração de paclitaxel (Gráficos 23A e 23B).
Gráfico 23: A deleção gênica do TLR4 previne o aumento de IL-6 e KC/CXCL1 no plasma de camundongos tratados com paclitaxel
(A) Quantificação de IL-1β. (B) Quantificação de TNF-α. (C) Quantificação de IL-6. (D) Quantificação de KC/CXCL1. A quantificação foi determinada pelo método de ELISA. *P <0,05: quando comparado com o grupo animais selvagens (WT) tratados com paclitaxel; (#) indica aumento significativo em relação ao naive, Os dados foram representados como a média ± E.P.M. para 4-6 animais, ANOVA de duas vias seguida por teste post-hoc de Bonferroni.
6.11.2 Quantificaçã de citocinas e quimiocinas no nervo isquiático.
O tratamento com paclitaxel provocou aumento significativo (p<0,05) de IL-1β, TNF-α, IL-6, KC/CXCL1 e MCP-1, em camundongos selvagens tratados com paclitaxel quando comparados com o grupo naive (Gráficos 24A, 24B, 24C, 24D e 24E).
No entanto, nos camundongos TLR4-/- tratados com paclitaxel a concentração de IL-1β (Gráfico 24A) foi reduzida significativamente (p<0,05) 4 e 6 horas após o tratamento com paclitaxel, quando comparados aos animais WT. Não foi observado aumento significativo de TNF-α (Gráfico 24B) quando comparado ao grupo naive. E quando comparados ao grupo de camundongos WT tratados com paclitaxel, observa-se significativa (p<0,05) redução desta citocina 4 e 6 horas após a administração de paclitaxel. IL-6 (Gráfico
24C) foi reduzido significativamente (p<0,05) em camundongos TLR4-/-, 2 e 6 horas após o tratamento com paclitaxel, quando comparados aos animais WT. A quimiocina MCP-1 (Gráfico 24D) aumentou significativamente (p<0,05) no grupo de animais WT tratados com paclitaxel. No entanto, em camundongos TLR4-/- foi observado uma redução significativamente (p<0,05) desta quimiocina 4 e 6 horas após a administração de paclitaxel, quando comparados aos animais WT. Já KC/CXCL1 (Gráfico 24E) foi significativamente (p<0,05) reduzida apenas 6 horas após o tratamento com paclitaxel, quando comparados com camundongos WT.
Gráfico 24: A deleção gênica do TLR4 previne o aumento de IL-1β, IL-6, MCP-1 e KC/CXCL1 no nervo isquiático de camundongos tratados com paclitaxel
(A) Quantificação de IL-1β. (B) Quantificação de TNF-α. (C) Quantificação de IL-6. (D) Quantificação de MCP-1. (E) Quantificação de KC/CXCL1. Os dados foram representados como a média ± E.P.M. para 4-6 animais. A quantificação foi determinada pelo método de ELISA. *P <0,05: quando comparado com o grupo animais selvagens (WT) tratados com paclitaxel; (#) indica aumento significativo em relação ao naive, Os dados foram representados como a média ± E.P.M. para 4-6 animais, ANOVA de duas vias seguida por teste post-hoc de Bonferroni.
6.11.3 Quantificação de citocinas e quimiocinas nos gânglios da raiz dorsal.
O tratamento com paclitaxel provocou aumento significativo (p<0,05) de TNF-α, IL-6 e KC/CXCL1, em camundongos WT tratados com paclitaxel quando comparados com o grupo naive (Gráficos 25B, 25C e 25E, respectivamente).
No entanto, nos camundongos TLR4-/- tratados com paclitaxel não foi observado aumento significativo de TNF-α (Gráfico 25B) quando comparado ao grupo naive. Quando
comparados ao grupo de camundongos WT tratados com paclitaxel, observa significativa (p<0,05) redução desta citocina, 4 e 6 horas após a administração de paclitaxel. Não foi observado aumento significativo de KC/CXCL1 (Gráfico 25E) quando comparado ao grupo naive. Já em comparação ao grupo de camundongos WT tratados com paclitaxel, observa significativa (p<0,05) redução desta quimiocina, 4 e 6 horas após a administração de paclitaxel. Não foi observado aumento significativo nos níveis de IL-1β e MCP-1 em camundongos WT (Gráficos 25A e 25D, respectivamente), e nos animais TLR4-/-. IL-6 não foi reduzida em comparação ao grupo WT (Gráfico 25C).
Gráfico 25: A deleção gênica do TLR4 previne o aumento de TNF-α e KC/CXCL1 nos gânglios da raiz dorsal de camundongos tratados com paclitaxel
(A) Quantificação de IL-1β. (B) Quantificação de TNF-α. (C) Quantificação de IL-6. (D) Quantificação de MCP-1. (E) Quantificação de KC/CXCL1. A quantificação foi determinada pelo método de ELISA. *P <0,05: quando comparado com o grupo animais selvagens (WT) tratados com paclitaxel; (#) indica aumento significativo em relação ao naive, Os dados foram representados como a média ± E.P.M. para 4-6 animais, ANOVA de duas vias seguida por teste post-hoc de Bonferroni.
6.11.4 Quantificação de citocinas e quimiocinas na medula espinal.
O tratamento com paclitaxel provocou aumento significativo de IL-1β, TNF-α, IL-6, MCP-1e KC/CXCL1 em camundongos selvagens tratados com paclitaxel quando comparados com o grupo naive (Gráficos 26A, 26B, 26C, 26D e 26E, respectivamente).
Na medula espinal de camundongos TLR4-/- tratados com paclitaxel, não foi observado aumento significativo de TNF-α (Gráfico 26B) quando comparado ao grupo naive.
Porém, quando comparados ao grupo de camundongos WT tratados com paclitaxel, observa significativa (p<0,05) redução de TNF-α apenas 6 horas após o tratamento com paclitaxel. Também não foi observado aumento significativo de MCP-1 (Gráfico 26D) quando comparado ao grupo naive. E quando comparados ao grupo de camundongos tratados com paclitaxel, observa significativa (p<0,05) redução desta quimiocina 6 horas após o tratamento com paclitaxel. KC/CXCL1 (Gráfico 26E) não teve aumento significativo quando comparado ao grupo naive. Já quando comparado ao grupo de camundongos WT tratados com paclitaxel, observa-se significativa (p<0,05) redução desta quimiocinas com 6 horas após o tratamento com paclitaxel, em comparação aos animais WT. Não foi observado diminuição significativa de IL-1β e IL-6 em camundongos TLR4-/- em comparação ao grupo WT (Gráficos 26A e 26C, respectivamente).
Gráfico 26: A deleção gênica do TLR4 previne o aumento de TNF-α, MCP-1 e KC/CXCL1 na medula espinal de camundongos tratados com paclitaxel
(A) Quantificação de IL-1β. (B) Quantificação de TNF-α. (C) Quantificação de IL-6. (D) Quantificação de MCP-1. (E) Quantificação de KC/CXCL1. A quantificação foi determinada pelo método de ELISA. *P <0,05: quando comparado com o grupo animais selvagens (WT) tratados com paclitaxel; (#) indica aumento significativo em relação ao naive, Os dados foram representados como a média ± E.P.M. para 4-6 animais, ANOVA de duas vias seguida por teste post-hoc de Bonferroni.
Os dados apresentados nessa seção demonstram que a ausência do receptor TLR4 previne o aumento de citocinas/quimiocinas quantificados pelo método de ELISA no plasma,
nervo isquiático, gânglios da raiz dorsal e medula espinal de camundongos tratados com paclitaxel. O resumo dos dados apresentados pode ser obervado em conjunto no quadro 4.
Quadro 4: A ausência do receptor TLR4 diminui a produção/liberação de citocinas e/ou quimiocinas, no plasma, nervo isquiático, gânglios da raiz dorsal e na medula espinal de camundongos tratados com paclitaxel
Resultados da redução dos níveis de citocinas/quimiocinas no plasma, nervo isquiático, gânglios da raiz dorsal e medula espinal de animais tratados com paclitaxel (PCX). Quantificação realizada pelo método de ELISA. ( + ) Aumento significativo em relação ao naive. ( - ) não houve aumento significativo em relação ao naive. ( < ) diminuição significativa em relação ao WT. ( na ) Não Avaliado.
6.12 Quantificação de IL-6, TNF-α, MCP-1 e KC/CXCL1 em cultura primária de