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Animais, anestesia

Foram utilizados ratos Wistar (Rattus norvegicus) machos. Os mesmos foram alojados em caixas individuais, com água e ração ad libitum, ciclo claro/escuro, temperatura ambiente. Os animais foram anestesiados com Tiopental, injetado por via intraperitoneal, na dose de 30mg/kg e colocados em posição supina em mesa apropriada com fixação dos quatro membros.

- Indução da pancreatite aguda

Os animais foram divididos nos seguintes grupos: controle manipulado (sham) (n=6; laparotomia,exposição sem oclusão do ducto pancreático principal), grupo oclusâo 12 h (n=6; oclusão do ducto pancreático (DP) por 12 horas e morte dos animais), grupo reversão 24 h (n=12; oclusão do ducto pancreático por 12 horas e morte após 24 horas da reversão), grupo reversão 48 h (n=10; oclusão do ducto pancreático por 12 horas e morte após 48 horas da reversão).

Os animais, com exceção do grupo sham , foram submetidos a procedimento cirúrgico como se segue: o primeiro passo, após anestesia, foi a laparotomia por meio de incisão na linha média, no abdômen superior, com cerca de 1,5 cm de extensão. A localização do DP e oclusão do mesmo foram o mais próximo possível da parede duodenal. A oclusão era realizada com um fio seda 3-0 amarrado com um nó sobre segmento de cateter de oxigênio número 14 (segmento de cateter com 0,5cm) conforme ilustrado na figura 1.

A parede abdominal foi suturada com fio Mononylon 3-0. A oclusão foi desfeita após 12 horas do procedimento inicial, com secção do fio com bisturi, usando o segmento de cateter como apoio. Nos casos em que havia a presença de líquido de ascite, era coletada alíquota de 1ml, através de pipeta automática.

Duodeno

Figura 1 - Modelo esquemático da ligadura do ducto pancreático principal (DPP)

a) Coleta de sangue, material para análise histológica

- Sangue - após a decapitação dos animais, o sangue foi coletado imediatamente para análise hematológica e bioquímica.

b) Determinações laboratoriais

- Amilase - atividade plasmática foi determinada utilizando-se o método de Caraway modificado (Labtest Diagnóstica, Lagoa Santa, MG, Brasil);

- Hematócrito: determinado através do Coulter CBC 25-.

Análise estatística

A análise estatística foi feita utilizando-se o programa SPSS 11.0 for Windows. Resultados expressos em média ± desvio padrão. A análise da variância, seguida pelo teste LSD, foi utilizada para comparação entre os grupos.

O estudo foi aprovado pelos Comitês Científicos e de Ética da Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul.

RESULTADOS

O tempo médio para a realização dos procedimentos, tanto da primeira quanto da segunda laparotomia, foi de 10 minutos após posicionamento dos animais já anestesiados. Não foram registrados acidentes de punção (punção de alças, injeção no subcutâneo) com o anestésico.

Ducto pancreatico Cateter de oxigênio

Houve elevação do valor da amilase no grupo onde foi realizada somente a oclusão do ducto pancreático. O valor da amilase regride depois de realizada a reversão da ligadura (figura 2).

0,00 2000,00 4000,00 6000,00 8000,00 10000,00 12000,00 14000,00

Sham Ocl.12h Rev.24h Rev.48h

Amilase U/l

Figura.2- Efeito da ligadura do ducto pancreático e sua reversão sobre os valores da amilase: sham=1347,57±744.82 U/l; Oclusão 12 horas(Ocl.12h)=9364±2819,35U/l; Revertido 24 horas(Rev.24h)=2877,25±1612,39 U/l; Revertido 48h(Rev.48h)=1062,50±162,09 U/l (* indica diferença estatística em relação ao grupo sham P<0,001; # indica diferença estatística com os demais grupos P<0,001; & indica diferença estatística em relação ao grupo Rev.48 P=0,047)

Houve aumento do valor do hematócrito no grupo onde foi realizado oclusão do ducto pancreático. O valor do hematócrito mostra decréscimo depois de retirada a ligadura (fig.3).

# *

0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00

Sham Ocl.12h Rev.24h Rev.48h

Ht %

Figura 2 - Efeito da ligadura e reversão da mesma sobre os valores do hematocrito: sham= 41,97±1,87 %; Oclusão 12 horas (Ocl.12h)=53,22±4,33 %; Revertido 24 horas( Rev.24h)=47,08±1,38 %; Revertido 48 horas (Rev.48h)=43,1±1,45% (* indica diferença significativa em relação ao grupo sham P<0,001; # indica diferença estatística em relação aos demais grupos com P≤ 0,001)

DISCUSSÃO

O modelo de pancreatite aguda, por oclusão ductal, tem seu foco na etiologia da pancreatite aguda, biliar na sua maioria, e tem grande relevância clinica (3,4). Alguns modelos de oclusão do ducto pancreático utilizam materiais de alto custo, como clampes e cateteres com balão, o que torna o procedimento pouco acessível.

O modelo aqui apresentado segue os mesmos princípios desses modelos, porem utilizando material de baixo custo. A técnica é de baixa complexidade e execução relativamente rápida, conforme demonstrado pelo tempo de execução médio de 10 minutos após anestesia.

A determinação da amilase sérica é o teste mais comumente utilizado para o diagnostico de pancreatite aguda (13). A elevação da amilase a níveis com significância estatística em relação ao grupo sham, demonstra que houve indução de pancreatite aguda e que a mesma foi causada pela oclusão do ducto e não pelo

#

* #

procedimento cirúrgico. A queda da amilase a valores próximos do basal demonstra a reversibilidade do processo. Tal evento não havia sido demonstrado na literatura revisada. A reversão da ligadura no modelo experimental utilizado procurou reproduzir os eventos que devem ocorrer após uma esfincterotomia endoscópica, ou seja, desfazer a obstrução do ducto pancreático.

Na pancreatite aguda pode haver depleção severa do volume intravascular e, como conseqüência, hipovolemia. Como essa depleção intravascular pode se manifestar como um hematócrito concentrado, foi postulado que a hemoconcentração poderia ser um marcador de pancreatite severa (14). No presente estudo, observou-se uma elevação do hematócrito no grupo submetido somente à ligadura do ducto pancreático. Esse valor apresentou queda progressiva após revertida a ligadura. Segundo Garnder et al. (14), as vantagens de determinar- se o hematocrito são que é uma medida de fácil realização e feita em quase todos os pacientes com pancreatite no momento da apresentação, não é caro, é acurado e reprodutível.

Concluímos que a modificação à técnica aqui apresentada (uso somente de segmento de cateter e fio de sutura) induz pancreatite aguda em animais de experimentação e que a mesma pode ser revertida com êxito. O método é de execução simples, rápida e barata, podendo ser utilizada para o estudo da patologia.

REFERENCIAS

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2) Foitzik T, Hotz HG, Eibel G, Buhr HJ. Experimental models of acute pancreatitis: are they suitable for evaluating theapy? Int J Colorestal Dis 2000;15:127-134. 3) Chan YC, Leung PO. Acute pancreatitis. Animal models and recent advances in

basic research. Pancreas 2007;34:1-14.

4) Osvaldt AB, Viero P, Costa MSTB, Bersch VP, Wendt LR, Rohde L. Pancreatite aguda biliar: um estudo de coorte prospective. Revista HCPA 2001;21:28-36. 5) Fan S. Lai ECS, Mok FPT, Lo C, Zheng S, Wong J. Early treatment of acute

biliary pancreatitis by endoscopic papilotomy. N Eng J Med 1993 Jan; 328:228- 32.

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8) Kaiser AM, Saluja AK, Steer ML. Repetitive short-term obstructions of the common bile-pancreatic duct induce severe acute pancreatitis in the opossum. Dig Dis Sci 1999 Aug;44(8):1653-1661.

9) Farkas G, Márton J, Nagy Z, et al. Experimental acute pancreatitis results in increased blood-brain barrier permeability in the rat: a potential role for tumor necrosis factor and interleukin 6. Neuroscience letters 1998;242:147-150.

10) Kruse P, Anderson ME, Loft S. Free radical. Biology & Medicine 2001;30(3):309-317.

11) Orda R., Hadas N, Orda S, Wiznitzer T. experimental acute pancreatitis: inducement by taorocholate sodium-trypsin injection into a temporarily closed duodenal loop in the rat. Arch Surg 1980 Mar;115:327-329.

12) Satake K, Miura A. A new model for pancreatitis. Pancreas 1998;16(3):284-288. 13) Granger J. Remick d. Acute pancreatitis: models, markers and mediators. Shock

2005;24:45-51.

14) Gardner TB, Olenec CA, Chertoff JD, Mackenzie TA, Robertson DJ. Hemoconcentration and pancreatic necrosis. Pancreas 2006;33:169-173.