De acordo com os resultados obtidos no presente trabalho, concluiu-se que:
1) O procedimento de seleção de plantas de toranja resistentes à Phytophthora spp. foi adequado para a obtenção e formação de plantas matrizes para serem utilizadas na hibridação somática como parental não-embriogênico.
2) Os protocolos utilizados para isolamento, fusão e cultura de protoplastos, bem como para a regeneração e aclimatização de plântulas foram eficientes, e permitiram a obtenção de 2 híbridos somáticos do parental embriogênico laranja ‘Hamlin’ com os parentais não embriogênicos toranjas ‘Indian Red’ e ‘Singapura’.
3) Ambos híbridos somáticos obtidos, combinando laranja ’Hamlin’ com toranja enxertada ‘Indian Red’ e laranja ‘Hamlin’ com ‘seedling’ selecionado de toranja ‘Singapura’, devem apresentar características complementares à dos parentais, podendo ser utilizados em programas de melhoramento de citros referentes à porta-enxertos.
ANEXO
Composição dos meios de cultura
1. Soluções estoque de macronutrientes do meio MT (50x) g.l-1
NH4NO3 82,5
KNO3 95,0
MgSo4.7H2O 18,5
KH2PO4 (monobásico) 7,5
K2HPO4 (dibásico) 1,0
2. Soluções estoque de micronutrientes do meio MT (100x) g.l-1
H3BO3 0,62 MnSO4.H2O 1,68 ZnSO4.7H2O 0,86 KI 0,083 Na2MoO4.2H2O 0,025 CuSO4.5H2O 0,0025 CoCl2.6H2O 0,0025
3. Soluções estoque de ferro do meio MT (50x) g.l-1
Na2EDTA 1,862
FeSO4.7H2O 1,372
4. Soluções estoque de vitaminas do meio MT (100x) g.l-1
Mio-inositol 10,0
Tiamina-HCl 1,0
Piridoxina-HCl 1,0
Ácido nicotínico 0,5
5. Solução estoque de cálcio do meio MT (66x) g.l-1
CaCl2.2H2O 29,33
6. Soluções estoque de macronutrientes do meio BH3 (100x) g.l-1
MgSO4 37,0
KH2PO4 (monobásico) 15,0
K2HPO4 (dibásico) 2,0
KCl 150,0
7. Soluções estoque de A multivitaminas do meio BH3 (100x) g.100ml-1
Pantotenato de cálcio 0,05 Ácido ascórbico 0,1 Cloreto de colina 0,05 Ácido p-aminobenzóico 0,001 Ácido fólico 0,02 Riboflavina 0,01 Biotina 0,001
8. Soluções estoque de B multivitaminas do meio BH3 (100x) g.100ml-1
Retinol (vitamina A) 0,001
Colecalciferol (vitamina D3) 0,001
Vitamina B12 0,002
9. Solução estoque de KI do meio BH3 (100x) g.100ml-1
KI 0,075
10. Soluções estoque de ácidos orgânicos do meio BH3 (50x) g.100ml-1
Piruvato de sódio 0,1
Ácido málico 0,2
Ácido fumárico 0,2
11. Soluções estoque de açúcares do meio BH3 (100x) g.100ml-1
Frutose 2,5 Ribose 2,5 Xilose 2,5 Manose 2,5 Ramose 2,5 Celobiose 2,5 Galactose 2,5 Manitol 2,5
12. Soluções estoque 1 de sais de CPW g.100ml-1
KH2PO4 0,2720
KNO3 1,0000
MgSO4 2,5000
KI 0,0016
CuSO4 0,000025
13. Solução estoque 2 de sais de CPW g.100ml-1
Meios de cultura 1. EME Regular (0,146M) S.E. de macronutrientes de MT (50x) 20 ml.l-1 S.E. de micronutrientes de MT (100x) 10 ml.l-1 S.E. de vitaminas de MT (100x) 10 ml.l-1 S.E. de cálcio de MT (66x) 15 ml.l-1 S.E. de ferro de MT (50x) 20 ml.l-1 Sacarose* 50 g.l-1 Extrato de malte 0,5 g.l-1 Ágar 8 g.l-1
Ajustar o pH para 5,8 com KOH
- Para cultura de calos e células em suspensão, autoclavar por 20 minutos a 15 psi.
* Para cultura de protoplastos, adicionar a sacarose nas seguintes proporções: para EME 0,6M = usar 205,38 g.l-1
para EME 0,7M = usar 239,61 g.l-1
para EME 0,8M = usar 273,84 g.l-1, e esterilizar em filtro de 0,2 µm.
2. H + H S.E. de macronutrientes de MT (50x) 20 ml.l-1 S.E. de macronutrientes de BH3 (100x) 5 ml.l-1 S.E. de micronutrientes de MT (100x) 10 ml.l-1 S.E. de vitaminas de MT (100x) 10 ml.l-1 S.E. de cálcio de MT (66x) 15 ml.l-1 S.E. de ferro de MT (50x) 20 ml.l-1 Sacarose 50 g.l-1 Extrato de malte 0,5 g.l-1 Glutamina 1,55 g.l-1
Ágar 8 g.l-1 Ajus tar o pH para 5,8 com KOH
Autoclavar por 20 minutos, a 15 psi 3. BH3 S.E. de macronutrientes de BH3 (100x) 10 ml.l-1 S.E. de micronutrientes de MT (100x) 10 ml.l-1 S.E. de vitaminas de MT (100x) 10 ml.l-1 S.E. de cálcio de MT (66x) 15 ml.l-1 S.E. de ferro de MT (50x) 20 ml.l-1 S.E. de A multivitaminas de BH3 (100x) 2 ml.l-1 S.E. de B multivitaminas de BH3 (100x) 1 ml.l-1 S.E. de KI de BH3 (100x) 1 ml.l-1 S.E. de açúcares de BH3 (100x) 10 ml.l-1
S.E. de ácidos orgânicos de BH3 (50x) 20 ml.l-1
Água de coco 20 ml.l-1 Extrato de malte 1 g.l-1 Sacarose* Manitol 81,99 g.l-1 Glutamina 3,1 g.l-1 Caseína hidrolisada 0,25 g.l-1
Ajustar o pH para 5,7 com KOH
* Adicionar a sacarose nas seguintes proporções: para BH3 0,6M = usar 51,35 g.l-1
para BH3 0,7M = usar 85,56 g.l-1
para BH3 0,8M = usar 119,77 g.l-1, e esterilizar em filtro de o,2 µm.
4. CPW ml.100ml-1
S.E. 1 de sais de CPW 1,0
S.E. 2 de sais de CPW 1,0
- Para CPW 25M, adicionar 25 g.100ml-1 de sacarose Ajustar o pH para 5,8 com KOH
Esterilizar em filtro de 0,2 µm 5. Solução Enzimática g.40ml-1 Manitol (0,7M) 5,12 CaCl2 (24,5mM) 0,144 NaH2PO4 (0,92mM) 0,0044 MES (6,15mM) 0,048 Celulase a 1% (Onozuka RS) 0,4 Macerase a 1%(R 10) 0,4 Pectolyase Y-23 a 0,2% 0,08
Ajustar o pH para 5,6 com KOH Esterilizar em filtro de 0,2 µm
6. Solução de PEG g.100ml-1
Polietilenoglicol (PM = 1450) 40,0
CaCl2.2H2O 0,97
Glicose 5,41
Ajustar o pH para 6,0 com KOH Esterilizar em filtro de 0,2 µm 7. Solução de lavagem “A”
Glicose 7,2 g.100ml-1
CaCl2.2H2O 0,97 g.100ml-1
DMSO 10 ml.100ml-1
Ajustar o pH para 6,0 com KOH Esterilizar em filtro de 0,2 µm
Glicina 2,25 Ajustar o pH para 10,5 com KOH
Esterilizar em filtro de 0,2 µm 9. Meio 1500 S.E. de macronutrientes de MT (50x) 20 ml.l-1 S.E. de micronutrientes de MT (100x) 10 ml.l-1 S.E. de vitaminas de MT (100x) 10 ml.l-1 S.E. de cálcio de MT (66x) 15 ml.l-1 S.E. de ferro de MT (50x) 20 ml.l-1 Sacarose 50 g.l-1 Extrato de malte 1,5 g.l-1 Ágar 8 g.l-1
Ajustar o pH para 5,8 com KOH Autoclavar por 20 minutos, a 15 psi 12. DBA3 S.E. de macronutrientes de MT (50x) 18 ml.l-1 S.E. de micronutrientes de MT (100x) 9 ml.l-1 S.E. de vitaminas de MT (100x) 9 ml.l-1 S.E. de cálcio de MT (66x) 15 ml.l-1 S.E. de ferro de MT (50x) 10 ml.l-1 Água de coco 20 ml.l-1 Sacarose 25 g.l-1 Extrato de malte 1,5 g.l-1 2,4-D (S.E. de 66,3 mg.l-1) 152 µl.l-1 BAP (S.E. de 1 mg.ml-1) 3 ml.l-1 Ágar 8 g.l-1
Ajustar o pH para 5,8 com KOH Autoclavar por 20 minutos, a 15 psi
13. RMAN S.E. de macronutrientes de MT (50x) 10 ml.l-1 S.E. de micronutrientes de MT (100x) 5 ml.l-1 S.E. de vitaminas de MT (100x) 5 ml.l-1 S.E. de cálcio de MT (66x) 15 ml.l-1 S.E. de ferro de MT (50x) 20 ml.l-1 NAA (S.E. de 279,3 mg.l-1) 72 µl.l-1 Carvão ativado 0,5 g.l-1 Sacarose 25 g.l-1 Ágar 8,0 g.l-1
Ajustar o pH para 5,8 com KOH Autoclavar por 20 minutos, a 15 psi
Meios de cultura para redução osmótica de protoplastos
1. Meio 1:1:1
1 parte de BH3 0,6M
1 parte de EME 0,6M
1 parte de EME regular (0,146M) Ajustar o pH para 5,7
Esterilizar em filtro de 0,2 µm 1. Meio 1:2
1 parte de BH3 0,6M
2 partes de EME Regular (0,146M) Ajustar o pH para 5,7
Esterilizar em filtro de 0,2 µm
Meio para indução de calos em óvulos abortados
Meio EME Regular (0,146M)
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
ABECITRUS. www.abecitrus.com.br (14 fev. 2003).
AFEK, U.; SZTEJNBERG, A. A rapid method for evaluationg citrus seedlings for resistance to foot rot caused by Phytophthora citrophthora. Plant Disease, v.74, n.1, p.66-68, 1990.
AMARO, A.A.; ARAÚJO, C.M.; PORTO, O.M.; DORNELLES, C.M.M.; CUNHA SOBRINHO, A.P.C.; PASSOS, O.S. Panorama da citricultura brasileira. In: RODRIGUEZ, Z.O.; VIÉGAS, F.C.P.; POMPEU JUNIOR, J.; AMARO, A.A. (Ed.). Citricultura Brasileira. São Paulo: Fundação Cargill, 1991. v.1, p.22- 59.
AMORIM, E.P.R. Controle biológico de Phytophthora parasitica Dastur e Phytophthora citrophthora (Smith & Smith) Leonian em plântulas de citros. Botucatu, 1997. 113p. Tese (Doutorado) - Faculdade de Ciências Agrárias, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”.
BARLASS, M.; SKENE, K.G.M. In vitro plantlet formation from Citrus species and hybrids. Scientia Horticulturae, v.17, p.331-341, 1982.
BARRET, H.C.; RHODES, A.M. A numerical taxonomic study of affinity relationships in cultivated Citrus its close relatives. Systematic Botany, v.1, n.2, p.105-136, 1976.
BENGOCHEA, T.; DODDS, J.H.A. Plant protoplast: a biotechnological tool for plant improvement. Cambridge: Capman & Hall, 1986. 90p.
BENEDITO, V.A. Hibridação somática entre tangerina ‘Cleópatra’ e laranja ‘Azeda’ por fusão de protoplastos. Piracicaba, 1999. 62p. Dissertação (Mestrado) - Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo.
BITTERS, W.P.; MURASHIGE, T.; RANGAN, T.S.; NAVER, E. Investigations on established virus-free citrus plants trough tissue culture. California Citrus Nurserymen’s Society, v.9, p.27-30, 1970.
BUTTON, J.; KOCHBA, J. Tissue culture in citrus industry. In: REINERT, J.; BAJAJ, Y.P.S. (Ed.). Applied and fundamental aspects of plant cell, tissue and organ culture. Berlin: Springer-Verlag, 1977. p.70-92.
CAMERON, J.W.; FROST, H.B. Genetics, breeding and nucellar embryony. In: REUTHER, W.; BATCHELOR, L.D.; WEBBER, H.J. (Ed.). The citrus industry. Berkeley: University of California, 1968. v.2, p.325-370.
CARNEIRO, V.T.C.; CONROI, T.; BARROS, L.M.G.; MATSUMOTO, K. Protoplastos: cultura e aplicações. In: TORRES, A.C.; CALDAS, L.S.; BUSO, J.A. (Ed.) Cultura de tecidos e transformação genética de plantas. Brasília: EMBRAPA, 1998. p.413-458.
CHAPOT, H. The citrus plant. In: CIBA-GEIGY Agrochemicals technical monograph. Citrus. 1975. 88p. (n.4)
CITROGRAF MUDAS. www.citrograf.com.br (18 jan. 2003).
COSTA, M.A.P.C. Hibridação somática em citros com ênfase ao melhoramento de porta-enxertos. Piracicaba, 2001. 122p. Tese (Doutorado) - Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo.
CRISTOFANI, M. Adaptação de metodologias de cultura de tecidos visando o melhoramento através de indução de mutações em Citrus sinensis (L.) Osbeck cv. Pêra. Piracicaba, 1991. 185p. Dissertação (Mestrado) – Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo.
CRISTOFANI, M. Mapas de ligação de Citrus sunki Hort. Ex. Tan. e Poncirus trifoliata (L.) Raf. cv. Rubidoux e localização do gene de resistência ao vírus da tristeza. Piracicaba, 1997. 140p. Tese (Doutorado) - Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo.
CRUZ, R.P.; MILACH, S.C.K. Análise de RAPD. In: MILACH, S.C.K. (Ed.) Marcadores moleculares em plantas. Porto Alegre: S.C.K. Milach, 1998. p.107-115.
DAVIES, F.; ALBRIGO, L. Citrus. Wallingford: CAB International, 1994. 254p. DAVIES, P.J. The role of hormones in plant development. In: HOPKINS, W.G.
Introduction to plant physiology. London: University of Western Ontario, 1995. cap.15, p.285-310.
DE BLOCK, M.. The cell biology of plant transformation: current state, problems, prospects and the implications for plant breeding. Euphytica, v.71, p.1-14, 1993.
DEIDDA, D. Embrioni nucellari di clementine ottenuti in vitro. Revista della Ortoflora-Frutticoltura Italiana, v.54, n.4, p.291-296, 1973.
DENG, X.X.; GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G. Intergeneric somatic hybrid plants from protoplast fusion of Fortunella crassifolia cultivar ‘Meiwa’ with Citrus sinensis cultivar ‘Valencia’. Scientia Horticulturae, v.49, p.55-62, 1992.
DOMINGUES, E.T.; TULMANN NETO, A.T.; TEÓFILO SOBRINHO, J. Importância das mutações somáticas no melhoramento das variedades de citros. Laranja, v.16, p.235-250, 1995.
DONADIO, L.C.; FIGUEIREDO, J.O.; PIO, R.M. Variedades cítricas brasileiras. Jaboticabal: Fundação Cargill, 1995. 228p.
ESAN, E.B. A detailed study of adventive embryogenesis in the rutaceae. Riverside, 1973. 233p. Thesis (Ph.D) - University of California.
EVANS, D.A. Protoplast fusion. In: EVANS, D.A.; SHARP, W.R.; AMIRATO, P.V.; YAMADA, Y. (Ed.). Handbook of plant cell culture. New York: McMillan Press, 1983. cap. 7, p.291-332.
FANG, D.Q.; ROOSE, M.L. A novel gene conferring citrus tristeza virus resistance in Citrus maxima (Burm.) Merrill. HortScience, v.34, n.2, p.334-335, 1999. FANG, D.Q.; FEDERICI, C.T.; ROOSE, M.L. A high resolution linkage map of the
citrus tristeza virus resistance gene region in Poncirus trifoliata (L.) Raf. Genetics, v.150, p.883-890, 1998.
FARIAS, P.C.M. Produção de híbridos somáticos de Citrus spp. pela fusão de protoplastos. Piracicaba, 2001. 115p. Tese (Doutorado) - Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo.
FEICHTENBERGER, E. Manejo ecológico de gomose de Phytophthora dos citros. São Paulo: Rhodia Agro, 1996. 42p.
FEICHTENBERGER, E. Manejo integrado das principais doenças de citros no Brasil. Fitopatologia Brasileira, v.25, p.288-295, 2000. Suplemento.
FEICHTENBERGER, E. Major diseases in the brazilian citrus nurseries. In: INTERNATIONAL CONGRESS OF CITRUS NURSERYMEN, 6., Ribeirão Preto, 2001. Proceedings. Ribeirão Preto: International Society of Citrus Nurserymen, 2001. p.49-52.
FEICHTENBERGER, E.; MULLER, G.W.; GUIRADO, N. Doenças dos citros. In: KIMATI, H. (Ed.). Manual de fitopatologia: doenças das plantas cultivadas. São Paulo: Agronômica Ceres, 1997, p.261-296.
FIGUEIREDO, J.O. de. Variedades copa de valor comercial. In: RODRIGUEZ, O.; VIÉGAS, F.; POMPEU JUNIOR, J.; AMARO, A.S. Citricultura brasileira. Campinas: Fundação Cargill, 1991. p.228-264.
FNP CONSULTORIA E COMÉRCIO. Agrianual 2003: anuário estatístico da agricultura brasileira. São Paulo, 2003, p.295-315.
FREASON, E.M.; POWE, J.B.; COCKING, E.C. The isolation, culture and regeneration of Petunia leaf protoplasts. Developmental Biology, v.33, p.130-137, 1973.
FUNDECITRUS. www.fundecitrus.com.br (07 jan. 2003).
GLEDDIE, S.C. Protoplasts and transformation procedures. In: GAMBORG, O.L.; PHILLIPS, G.C. (Ed.). Plant cell tissue and organ culture: fundamental methods. Berlin: Springer-Verlag, 1995. cap.14, p.167-180.
GMITTER JUNIOR, F.G.; LING, X.B.; DENG, X.X. Induction of triploid Citrus plants from endosperm calli in vitro. Theoretical and Applied Genetics, v.80, p.785-790, 1990.
GMITTER JUNIOR, F.G.; GROSSER, J.W.; MOORE, G.A. Citrus. In: HAMMERSCHLAG, F.A.; LITZ, R.E. (Ed.). Biotechnology of perenial fruit crops. Cambridge: University Press, 1992. cap.14, p.335-369.
GOH, C.J.; SIM, G.E.; MORALES, C.L.; LOH, C.S. Plantlet regeneration through different morphogenic pathways in pommelo tissue culture. Plant, Cell, Tissue and Organ Culture, v. 43, p. 301-303, 1995.
GRAHAM, J.H. Evaluation of tolerance of citrus rootstocks to Phytophthora root rot in chlamydospore-infected soil. Plant Disease, v.74, n.10, p.743-746, 1990.
GRAHAM, J.H. Root regeneration and tolerance of citrus rootstocks to root rot caused by Phytophthora nicotianae. Phytopathology, v.85, n.1, p.111-117, 1995.
GRAMBOW, H.J.; KAO, K.N.; MILLER, R.A.; GAMBORG, O.L. Cell division and plant development from protoplasts of carrot cell suspension cultures. Planta, v.13, p.348-355, 1972.
GRIMM, G.R.; HUTCHISON, D.J. A procedure for evaluating resistance of citrus seedlings to Phytophthora parasitica. Plant Disease Reporter, v.57, n.8, p.669-672, 1973.
GRIMM, G.R.; HUTCHISON, D.J. Evaluation of Citrus spp., relatives, and hybrids for resistance to Phytophthora parasitica Dastur. Proceedings of the International Society of Citriculture, v.3, p.863-865, 1977.
GROSSER, J.W. Citrus scion and rootstocks improvement via somatic hybridization. Acta Horticulturae, n.336, p.297-305, 1993.
GROSSER, J.W. In vitro culture of tropical fruits. In: VASIL, I.K.; THORPE, T.A. (Ed.). Plant cell and tissue culture. Dordrecht: Kluwer Academic, 1994. cap.19, p.475-496.
GROSSER, J.W.; CHANDLER, J.L. Aseptic isolation of leaf protoplasts from Citrus, Poncirus, Citrus x Poncirus hybrids and Severinia for use in somatic hybridization experiments. Scientia Horticulturae, v.31, p.253-257, 1987. GROSSER, J.W.; CHANDLER, J.L. Somatic hybridization of high yield, cold-hardy
and disease resistant parents for citrus rootstock improvement. Journal of Horticultural Science & Biotechnology, v.75, n.6, p.641-644, 2000.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G. Protoplast fusion and citrus improvement. Plant Breeding Reviews, v.8, p.339-374, 1990a.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G. Somatic hybridization of Citrus with wild relatives for germoplasm enhancement and cultivar development. HortScience, v.25, n.2, p.147-151, 1990b.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; CASTLE, W.S. Production and evaluation of citrus somatic hybrid rootstock: progress report. Proceedings of the Florida State for Horticultural Society, v. 108, p.140-143, 1995.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; CHANDLER, J.L Intergeneric somatic hybrids plants of Citrus sinensis cv. ‘Hamlin’ and Poncirus trifoliata cv. ‘Frying Dragon’. Plant Cell Reports, v.7, p.5-8, 1988a.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; CHANDLER, J.L. Intergeneric somatic hybrid from sexually incompatible woody species: Citrus sinensis and Severinia discha. Theoretical and Applied Genetics, v.75, p.397-401, 1988b.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; CHANDLER, J.L. Somatic hybrid plants from sexually incompatible woody species: Citrus reticulata and Citropsis gilletiana. Plant Cell Reports, v.8, p.656-659, 1990.
GROSSER, J.W.; MOORE, G.A.; GMITTER JUNIOR, F.G. Interspecific somatic hybrid plants from fusions of ‘Key’ lime (Citrus aurantifolia) with ‘Valência’ sweet orange (Citrus sinensis) protoplasts. Scientia Horticulturae, v.39, p.23-29, 1989.
GROSSER, J.W.; OLLITRAUT, P.; OLIVARES-FUSTER, O. Invited review: somatic hybridization in Citrus: an effective tool to facilite variety improvement. In Vitro Celular Developmental Biology, v.36, p.434-449, 2000a.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; CASTLE, W.S.; CHANDLER, J.L. Somatic hybridization: a new approach to citrus rootstock improvement. Fruits, v.53, n.5, p.331-334, 1998a.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; FLEMING, G.H.; CHANDLER, J.L. Applications of biotechnology to citrus cultivar improvement at the Citrus Research and Education Center. Acta Horticulturae, n.535, p.213-220, 2000b.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; LOUZADA, E.S.; CHANDLER, J.L. Production of somatic hybrid and autotretaploid breeding parents for seedless citrus development. HortScience, v.27, n.10, p.1125-1127, 1992a.
GROSSER, J.W.; LOUZADA, E.S.; GMITTER JUNIOR, F.G.; CHANDLER, H.L. Somatic hybridization of complementary citrus rootstocks: five new hybrids. HortScience, v.29, n.7, p.812-813, 1994.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; SESTO, F.; DENG, X.X.; CHANDLER, J.L. Six new hybrids somatics and their potential for cultivar improvement. Journal of the American Society for Horticultural Science, v.117, n.1, p.169-173, 1992b.
GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; TUSA, N.; REFORGIATO RECUPERO, G.; CUCINOTTA, P. Further evidence of a cybridization requeriment for plant regeneration from citrus leaf protoplasts following somatic fusion. Plant Cell Reports, v.15, p.672-676, 1996a.
GROSSER, J.W.; JIANG, J.; LOUZADA, E.S.; CHANDLER, J.L.; GMITTER JUNIOR, F.G. Somatic hybridiztion, an integral component of citrus cultivar improvement: II. Rootstock improvement. HortScience, v.33, n.6, p.1060- 1061, 1998c.
GROSSER, J.W.; JIANG, J.; MOURÃO FILHO, F.A.A.; LOUZADA, E.S.; CHANDLER, J.L.; GMITTER JUNIOR, F.G. Somatic hybridization, an integral component of citrus cultivar improvement: I. Scion improvement. HortScience, v.33, n.6, p.1057-1059, 1998b.
GROSSER, J.W.; MOURÃO FILHO, F.A.A.; GMITTER JUNIOR, F.G.; LOUZADA, E.S.; RANG, J.; BAERGEN, K.; QUIROS, A.; CABASSON, C.; SCHELL, J.L.; CHANDLER, J.L. Allotetraploid hybrids between Citrus and seven related genera produced by somatic hybridization. Theoretical and Applied Genetics, v.92, p.557-582, 1996b.
GUO, W.W.; DENG, X.X. Somatic hybrid plantlets regeneration between Citrus and its wild relative, Murraya paniculata via protoplast electrofusion. Plant Cell Reports, v.18, p.297-300, 1998.
GUO, W.W.; DENG, X.X.; SHI, Y.Z. Optimization of electrofusion parameters and interspecific somatic hybrid regeneration in citrus. Acta Botanica Sinica, v.40, p.417-424, 1998.
HIDAKA, T.; KAJIURA, I. Plantlet differentiation from callus protoplasts induced from Citrus embryo. Scientia Horticulturae, v.34, p.85-92, 1988.
HODGSON, R.W. Horticultural varieties of Citrus. In: REUTHER, W.; BATCHELOR, L.D.; WEBBER, H.J. (Ed.). The citrus industry, Berkeley: University of California, 1967, p.431-591.
HOISINGTON, D.; KHAIRALLAH, M.; GONZÁLEZ-DE-LEÓN. Laboratory protocols: CIMMYT Applied Molecular Genetics Laboratory. 2.ed. México: CIMMYT, 1994. 88p.
HUANG, S-C.; CHEN, M-T.; CHIU, D-S. In vitro graft-enhanced nucellar plant development in the monoembryonic Citrus grandis L. Journal of Horticultural Science, v.63, n.4, p.705-709, 1988.
HUANG, S-C.; CHEN, M-T.; WU, T-S. Alkaloids and coumarins from stem bark of Citrus grandis. Phytochemistry, v.28, n.12, p.3574-3576, 1989.
HUTCHISON, D.J.; GRIMM, G.R. Citrus clones resistant to Phytophthora parasitica: 1973 screening results. Proceedings of the Florida State for
Horticultural Society, v.86, p.88-91, 1973.
HUTCHISON, D.J.; O’BANNON, J.H.; GRIMM, G.R.; BRIDGES, G.D. Reaction of selected citrus rootstocks to foot rot, burrowing and citrus nematodes. Proceedings of the Florida State for Horticultural Society, v.85, p.39-43, 1972.
JIMÉNEZ, V.M. El cultivo de protoplastos em cítricos y su potencial para el mejoramiento genético. Agronomia Costarricense, v.20, n.2, p.187-204, 1996.
JUMIN, H.B.; NITO, N. Plant regeneration via somatic embryogenesis from protoplasts of six plants especies related to Citrus. Plant Cell Reports, v.15, p.332-336, 1996.
JUAREZ, J.; NAVARRO, L.; GUARDIOLA, J.L. Obtention de plants nucellaires de divers cultivars de clémentiniers au moyen della culture de nucelle in vitro. Fruits, v.31, p.751-762, 1976.
JUNTILLA, O. Allelopathy in Heracleum laciniatum : inhibition of lettuce seed germination and root growth. Physiologia Plantarum, v.33, p.22-27, 1975. KAO, K.N.; MICHAYLUK, M.R. A method for high frequency intergeneric fusion of
plant protoplast. Planta, v.115, p.335-367, 1974.
KOBAYASHI, S.; IKEDA, I.; UCHIMIYA, H. Conditions for high frequency embryogenesis from orange (Citrus sinensis Osb.) protoplasts. Plant Cell Tissue and Organ Culture, v.4, p.149-159, 1985.
KOBAYASHI, S.; FUJIWARA, K.; OIYAMA, T.; OHGAWARA, T.; ISHII, S. Somatic hybridization between navel orange and ‘Murcott’ tangor. In: INTERNATIONAL CITRUS CONGRESS, 6., 1988a. Proceedings. 1988a. v.1, p.135-140. KOBAYASHI, S.; FUJIWARA, K.; OIYAMA, T.; OHGAWARA, T.; ISHII, S. A
somatic hybrid plant obtained by protoplast fusion between navel orange (Citrus sinensis) and satsuma mandarin (Citrus unshiu). Plant cell, tissue and organ culture, v.14, n.2, p.63-69, 1988b.
KOBAYASHI, S.; OIYAMA, I.; YOSHINAGA, K.; OHGAWARA, T.; ISHII, S. Fertility in na intergeneric somatic hybrid plant of Rutaceae. HortScience, v.26, p.207, 1991.
KOCHBA, J.; SPIEGEL-ROY, P.; SAFRAM, H. Adventives plants from ovules and nucelli in Citrus. Planta, v.106, p.237-245, 1972.
KOLLER, O.C. Citricultura: laranja, limão e tangerina. Porto Alegre: Rígel, 1994. cap.5, p.49-62: Melhoramento e cultivares.
KUMAR, A.; COCKING, E.C. Protoplast fusion: a novel approach to organelle genetics in higher plants. American Journal of Botany, v.74, n.8, p.1289- 1303, 1987.
KUNITAKE, H.; MII, M. Somatic embryogenesis in Citrus species. In: BAJAJ, Y.P.S. (Ed.). Somatic embryogenesis and syntetic seed I. Berlin: Springer-Verlag, 1995. p.280-298.
KUPIDLOWSKA, E.; KOWALEC, M.; SULKOWSKI, G.; ZOBEL, A.M. The effect of coumarins on root elongation and ultraestructure of meristematic cell protoplast. Annals of Botany, v. 73, p.525-530, 1994.
LATADO, R.R. Hibridação somática entre limão Cravo (Citrus limonia Osbeck) e tangerina Cleópatra (Citrus reshni Hort.). Piracicaba, 1998. 146p. Tese (Doutorado) – Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo.
LING, J-T.; IWAMASA, M. Somatic hybridization between Citrus reticulata and Citropsis gabunensis through electrofusion. Plant Cell Reports, v.13, p.493- 497, 1994.
LING, J-T.; NITO, N.; IWAMASA, M. Plant regeneration from protoplasts of Calamondin (Citrus madurensis Lour.). Scientia Horticulturae, v.39, p.325- 333, 1989.
LING, J-T.; NITO, N.; IWAMASA, M.; KUNITAKE, H. Plant regeneration from protoplast isolated from embriogenic callus of Satsuma. HortScience, v.25, n.8, p.970-972, 1990.
LOUZADA, E.S. Possibilidades do uso da biotecnologia em citros. Laranja, v.11, n.1, p.151-165, 1990.
LOUZADA, E.S.; GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G. Intergeneric somatic hybridization of sexually incompatible parents: Citrus sinensis and Atalantia ceylanica. Plant Cell Reports, v.12, p.687-690, 1993.
LOUZADA, E.S.; GROSSER, J.W.; GMITTER JUNIOR, F.G.; NIELSEN, B.; CHANDLER, J.L. Eight new somatic hybrid citrus rootstock with potential for improved disease resistence. HortScience, v.27, n.9, p.1033-1036, 1992. MATHERON, M.E.; WRIGHT, G.C.; PORCHAS, M. Resistance to Phytophthora
citrophthora and P. parasitica and nursery characteristics of several citrus rootstocks. Plant Disease, v.82, n.11, p.1217-1225, 1998.
MENDES, B.M.J.; MOURÃO FILHO, F.A.A.; FARIAS, P.C.M.; BENEDITO, V.A. Citrus somatic hybridization with potencial for improved blight and CTV resistance. In Vitro Cellular Developmental Biology - Plant, v.37, n.4, p.256-261, 2001.
MENDES-DA-GLÓRIA, F.J. Hibridação somática entre laranja ‘Caipira’ e limão ‘Cravo’ através de fusão de protoplasto. Piracicaba, 1998. 78p. Dissertação (Mestrado) - Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo.
MENDES-DA-GLÓRIA, F.J.; MOURÃO FILHO, F.A.A.; MENDES, B.M.J. Plant regeneration from protoplast of Brazilian Citrus cultivars. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v.35, n.4, p.727-732, 2000.
MIRANDA, M.; MOTOMURA, T.; IKEDA, F.; OHGAWARA, T.; SAITO, W.; ENDO, T.; OMURA, M.; MORIGUCHI,T. Somatic hybrid obtained by fusion between Poncirus trifoliata (2x) and Fortunella hindsii (4x) protoplasts. Plant Cell
Reports, v.16, p.401-405, 1997.
MITRA, G.C.; CHATUVERDI, H.C. Embryoids and complete plants from unpollinated ovaries and from ovules of in vitro grown emasculated flower buds of Citrus spp. Bulletin of Torrey Botanical Club, v.99, p.184-189, 1972. MOORE, G.A.; GUY, C.L.; TOZLU, I.; WEBER, C.A. Mapping quantitative trait loci
for salt tolerance and cold tolerance in Citrus grandis (L.) Osb. x Poncirus trifoliata (L.) Raf. hybrid populations. Acta Horticulturae, n. 535, p.37-45, 2000.
MOREIRA, S. Experiências de cavalos para citrus I. Bragantia, v.1, n.8/9, p.525- 544, 1941.
MOREIRA, S. Clones nucelares: caminho para uma nova citricultura. Revista de Agricultura, v.37, p.73-82, 1962.
MOREIRA, C.S.; PIO, R.M. Melhoramento de citros. In: RODRIGUEZ, O.; VIÉGAS, F.; POMPEU JUNIOR, J.; AMARO, A.S. Citricultura brasileira. Campinas: Fundação Cargill, 1991. p.116-152.
MORIGUCHI, T.; HIDAKA, T.; OMURA, M.; MOTOMURA, T.; AKIHAMA, T. Genotype and parental combination influence efficiency of cybrid induction in Citrus by eletrofusion. HortScience, v.31, n.2, p.275-278, 1996.
MORIGUCHI, T.; MOTOMURA, T.; HIDAKA, T.; AKIHAMA, T.; OMURA, M. Analysis of mitocondrial genomes among Citrus plants produced by the interspecific somatic fusion of ‘Seminole’ tangelo with rough lemon. Plant Cell Reports, v.16, p.397-400, 1997.
MOTOMURA, T.; HIDAKA, T.; MORIGUCHI, T.; AKIHAMA, T.; OMURA, M. Intergeneric somatic hybrids between Citrus and Atalantia or Severinia by eletrofusion, and recombination of mitochondrial genomes. Breeding Science, v. 45, p.309-314, 1995.
MOURÃO FILHO, F.A.A. Protoplast fusion of citrus for rootstock and scion improvement with emphasis on wide hybridization. Gainesville, 1995. 152p. Tese (Ph.D) - University of Florida.
MOURÃO FILHO, F.A.A. Produção de híbridos somáticos em citros. Laranja, v.17, n.1, p.179-197, 1996.
MOURÃO FILHO, F.A.A.; GMITTER JUNIOR, F.G.; GROSSER, J.W. New tetraploid breeding parents for triploid seedless citrus cultivar development. Fruit Varieties Journal, v.50, n.2, p.76-80, 1996.
MULLER, G.W.; COSTA, A.S. Doenças causadas por vírus, viróides e similares em citros. In: RODRIGUEZ, O.; VIÉGAS, F.; POMPEU JUNIOR, J.; AMARO, A.A. Citricultura brasileira. Campinas: Fundação Cargill, 1991. v.2, p.735- 762.
MULLER, G.W.; TARGON, M.L.P.N.; MACHADO, M.A. Trinta anos de uso do clone pré-imunizado de ‘Pêra IAC’ na citricultura paulista. Laranja, v.20, n.2, p.399-408, 1999.
MURASHIGE, T.; TUCKER, D.P.H. Growth factor requirements of citrus tissue culture. In: CITRUS SYMPOSIUM, 1., Riverside, 1969. Proceedings. Riverside: University of California, 1969. p.1155-1161.
NAVARRO, L.; JUAREZ, J. Tissue culture techniques used in Spain to recover virus-free citrus plants. Acta Horticulturae, n.78, p.425-435, 1977.
NEVES, E.M. A competitividade da agroindústria citrícola brasileira: vantagens comparativas e o dilema das barreiras comerciais. Piracicaba: ESALQ, 1996. 125p. (Relatório de pesquisa para CNPq).
NEVES, E.M.; BOTEON, M. Impactos alocativos e distributivos na citricultura. Preços Agrícolas, n.136, p.3-6, 1998.
NEVES, E.M.; NEVES, M.F. Suco concentrado de laranja. Uma commodity sui generis. Preços Agrícolas, v.10, n.114, p.11-13, 1996.
NEGRUTIU, I.; DE BROWER, D.; WATTS, J.W.; SIDOROV, V.I.; DIRKS, R.; JACOBS, M. Fusion of plant protoplasts: a study using auxotrophic mutants of Nicotiana plumbafinifolia viviani. Theoretical and Applied Genetics, v.72,