Kvalitative Interviews

Como outro passo foi investigado a possível participação de neuropeptídios, receptores e mediadores inflamatórios que poderiam estar presentes e atuando a nível periférico, através da analise por imunohistoquímica.

Após as administrações de OXL (1mg/kg, EV) foi realizado o sacrifício dos animais seguindo os esquemas cronológicos de 24h, 7,14 21 e 28 dias e a retirada da pele das patas traseiras para parafinização e posterior realização de imunohistoquímica para neuropeptídeos como SP e CGRP, receptores periféricos do tipo NMDA e VR1 além do principal mediador inflamatório, a citocina TNF.

A imunohistoquímica demonstrou que houve um aumento da expressão dos mediadores CGRP, SP e NMDA, o que não foi observado com TNF e VR1.

Ao analisar a imunohistoquímica com o anticorpo CGRP da pele das patas traseiras dos camundongos tratados com OXL observou-se que houve um aumento da expressão a partir de 24h atingindo o pico máximo em 7 dias, regredindo até o 28º dia quando comparado ao grupo controle (Figura 25).

Na imunohistoquímica para SP da pele das patas traseiras dos camundongos tratados com OXL observou-se que houve expressão a partir de 24h atingindo o pico máximo em 7 e 14 dias, regredindo até o 28º dia quando comparado ao grupo controle (Figura 26).

Ao analisar a imunohistoquímica com o anticorpo NMDA da pele das patas traseiras dos camundongos tratados com OXL observou-se leve expressão em 7

dias atingindo o máximo em 21 dias, regredindo até o 28º dia quando comparado ao grupo controle (Figura 27).

Já ao analisar os anticorpos TNF e VR1 não houve alteração da expressão quando comparado ao grupo controle, como observado nas figuras 28 e 29 respectivamente.

Foi realizada, também, a imunomarcação para nitrotirosina, onde houve somente discreto aumento a partir do 7º dia até o 21º quando comparado ao grupo controle, sendo observado principalmente em células da derme (Figura 30).

Figura 24. Análise histopatológica de pele de pata de camundongos submetidos ao tratamento com oxaliplatina. A e B: Controle Normal; C e D: Oxaliplatina (1 mg/kg), após

as 8 injeções. Não houve diferenças entre o grupo controle e o tratado com oxaliplatina. Coloração hematoxilina-eosina (painéis A e C 100x; painéis B e D 400x).

Figura 25. Fotomicrografias da marcação por imunohistoquímica para CGRP em pele de pata de camundongos submetidos ao tratamento com oxaliplatina. Os animais

foram tratados com oxalipaltina (OXL; 1 mg/kg; EV), a cada semana e foi retirada da pele das patas traseiras para realização de imunohistoquímica, seguindo o esquema cronológico de 24h, 7,14 21 e 28 dias. O protocolo de 2 injeções por semana foi seguido, com exceção do grupo 24h que recebeu apenas 1 injeção 24h antes da eutanásia. A: Controle negativo (Cont. Neg) pele da pata colhida com 7 dias de animais injetados com OXL na ausência do anticorpo primário. B: O grupo controle (normal) recebeu o veiculo. C a G: O restante das fotos são animais injetados com OXL e estão indicadas com os respectivos dias de coleta (400x).

Figura 26. Fotomicrografias da marcação por imunohistoquímica para SP em pele de pata de camundongos submetidos ao tratamento com oxaliplatina. Os animais foram

tratados com oxalipaltina (OXL; 1 mg/kg; EV), a cada semana e foi retirada da pele das patas traseiras para realização de imunohistoquímica, seguindo o esquema cronológico de 24h, 7,14 21 e 28 dias. O protocolo de 2 injeções por semana foi seguido, com exceção do grupo 24h que recebeu apenas 1 injeção 24h antes da eutanásia. A: Controle negativo (Cont. Neg) pele da pata colhida com 7 dias de animais injetados com OXL na ausência do anticorpo primário. B: O grupo controle (normal) recebeu o veiculo. C a G: O restante das fotos são animais injetados com OXL e estão indicadas com os respectivos dias de coleta (400x).

Figura 27. Fotomicrografias da marcação por imunohistoquímica para NMDAR em pele de pata de camundongos submetidos ao tratamento com oxaliplatina. Os animais

foram tratados com oxalipaltina (OXL; 1 mg/kg; EV), a cada semana e foi retirada da pele das patas traseiras para realização de imunohistoquímica, seguindo o esquema cronológico de 24h, 7,14 21 e 28 dias. O protocolo de 2 injeções por semana foi seguido, com exceção do grupo 24h que recebeu apenas 1 injeção 24h antes da eutanásia. A: Controle negativo (Cont. Neg) pele da pata colhida com 7 dias de animais injetados com OXL na ausência do anticorpo primário. B: O grupo controle (normal) recebeu o veiculo. C a G: O restante das fotos são animais injetados com OXL e estão indicadas com os respectivos dias de coleta (400x).

Figura 28. Fotomicrografias da marcação por imunohistoquímica para TNF em pele de pata de camundongos submetidos ao tratamento com oxaliplatina. Os animais foram

tratados com oxalipaltina (OXL; 1 mg/kg; EV), a cada semana e foi retirada da pele das patas traseiras para realização de imunohistoquímica, seguindo o esquema cronológico de 24h, 7,14 21 e 28 dias. O protocolo de 2 injeções por semana foi seguido, com exceção do grupo 24h que recebeu apenas 1 injeção 24h antes da eutanásia. A: Controle negativo (Cont. Neg) pele da pata colhida com 7 dias de animais injetados com OXL na ausência do anticorpo primário. B: O grupo controle (normal) recebeu o veiculo. C a G: O restante das fotos são animais injetados com OXL e estão indicadas com os respectivos dias de coleta (400x).

Figura 29. Fotomicrografias da marcação por imunohistoquímica para VR1 em pele de pata de camundongos submetidos ao tratamento com oxaliplatina. Os animais foram

tratados com oxalipaltina (OXL; 1 mg/kg; EV), a cada semana e foi retirada da pele das patas traseiras para realização de imunohistoquímica, seguindo o esquema cronológico de 24h, 7,14 21 e 28 dias. O protocolo de 2 injeções por semana foi seguido, com exceção do grupo 24h que recebeu apenas 1 injeção 24h antes da eutanásia. A: Controle negativo (Cont. Neg) pele da pata colhida com 7 dias de animais injetados com OXL na ausência do anticorpo primário. B: O grupo controle (normal) recebeu o veiculo. C a G: O restante das fotos são animais injetados com OXL e estão indicadas com os respectivos dias de coleta (400x).

Figura 30. Fotomicrografias da marcação por imunohistoquímica para nitrotirosina em pele de pata de camundongos submetidos ao tratamento com oxaliplatina. Os animais

foram tratados com oxalipaltina (OXL; 1 mg/kg; EV), a cada semana e foi retirada da pele das patas traseiras para realização de imunohistoquímica, seguindo o esquema cronológico de 24h, 7,14 21 e 28 dias. O protocolo de 2 injeções por semana foi seguido, com exceção do grupo 24h que recebeu apenas 1 injeção 24h antes da eutanásia. A: Controle negativo (Cont. Neg) pele da pata colhida com 7 dias de animais injetados com OXL na ausência do anticorpo primário. B: O grupo controle (normal) recebeu o veiculo. C a G: O restante das fotos são animais injetados com OXL e estão indicadas com os respectivos dias de coleta (400x).