A proporção de acetonitrila e Solução de acetato de amônio 5 mM, pH 3,0 na fase móvel foi ajustada para cada coluna cromatográfica (MN, NF e Sub 2 μm), de maneira que os fatores de retenção (k) de todos os antidiabéticos ficassem próximos aos verificados na coluna convencional. Esse procedimento foi realizado para permitir a comparação do desempenho das colunas cromatográficas, que será descrita no capítulo 4. Como os valores de k influenciam na eficiência e formato das curvas de Van Deemter, devem ser ajustados em todas as colunas [30].
No caso da coluna monolítica, para que a retenção observada na coluna convencional fosse mantida, foi necessário reduzir a força eluotrópica da fase móvel. Já com a coluna de partículas sub 2 μm ocorreu o contrário e portanto a manutenção dos fatores de retenção ocorreu mediante aumento da força eluotrópica da fase móvel. Apesar de a coluna de núcleo fundido apresentar capacidade de retenção um pouco menor do que a coluna convencional, na prática nenhum ajuste na força da fase móvel foi necessário. Na Tabela 1.6 há a descrição das condições selecionadas para a análise e os valores de k dos antidiabéticos em cada uma das colunas.
Tabela 1.6- Condições de análise para determinação de antidiabéticos nas diferentes colunas e valores de k
Colunas
Fase Móvel Vinj (μl) (nm) T (oC) Conc. (μg/ml) K Convencional ACN: Solução
(50:50)** 2 230 30 100
CL 1,3 - GB 2,7 GZ 4,2 - GM 5,2
Monolítica ACN: Solução
(43:57)** 2 230 30 100 CL 0,9 - GB 2,2 GZ 4,3 - GM 5,5 Núcleo Fundido ACN: Solução (50:50)** 2 230 30 100 CL 1,3 - GB 2,7 GZ 4,5 - GM 5,6
Sub 2 μm ACN: Solução
(53:47)** 2 230 30 100
CL 1,2 - GB 2,7 GZ 4,2 - GM 5,2 * Foram utilizados loop de 10 μl, tubo de PEEK de 0,004 polegada e frequência de aquisição dos dados e constante de tempo do detector iguais a 20 Hz/0,1 s
5 CONCLUSÃO
Método analítico para quantificação de clorpropamida, glibenclamida, glimepirida e gliclazida foi desenvolvido e otimizado em coluna convencional com partículas totalmente porosas de 5 μm de diâmetro. Posteriormente, as condições analíticas selecionadas foram transferidas e otimizadas para a análise dos antidiabéticos utilizando colunas monolítica, empacotada com partícula de núcleo fundido e empacotada com partículas totalmente porosas sub 2 μm. O único ajuste realizado foi na proporção de acetonitrila e solução de acetato de amônio 5mM pH 3,0 na fase móvel. Esses métodos, descritos na Tabela 1.6, foram utilizados nas etapas subsequentes desse trabalho.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] WORLD HEALTH ORGANIZATION. Disponível em: <http://www.who.int/ mediacentre/factsheets/fs312/en/index.html>. Acesso em: 29 de agosto de 2012. [2] DIRETRIZES DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE DIABETES 2009. Disponível em: <http://www.diabetes.org.br/attachments/diretrizes09_final.pdf>. Acesso em: 28 de agosto de 2012.
[3] ARAÚJO, L. M.B.; BRITTO, M. M.S; CRUZ, T. R. P. Tratamento do Diabetes Mellitus do Tipo 2: Novas Opções. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e
Metabologia. v. 44, n. 6, p. 509-518, 2000.
[4] LEBOVITZ, H. E. Type 2 diabetes mellitus-current therapies and the emergence of surgical options. Nature Reviews Endocrinology. v. 7, p. 408-419, 2011.
[5] OVER, R. K.; RATNER, R. E. Combination Pharmacotherapy with Incretins: What Works Best and When? Current Diabetes Reports. v. 8, p. 361-367, 2008.
[6] WEISSMAN, P. N. Reappraisal of the Pharmacologic Approach to Treatment of Type 2 Diabetes Mellitus. American Journal of Cardiology. v. 90 (supllement), p. 42- 50, 2002.
[7] RELAÇÃO NACIONAL DE MEDICAMENTOS – RENAME, 2012. Disponível em: <http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/anexos_rename_2012_pt_533_30_03_ 12.pdf>. Acesso em: 28 de Agosto de 2012.
[8] SEINO, S. Cell signalling in insulin secretion: the molecular targets of ATP, cAMP and sulfonylurea. Diabetologia. v. 55, p. 2096-2108, 2012.
[9] BRUNTON, L.L.; LAZO, J. S.; PARKER, K. L (ED). Goodman & Gilman As bases
farmacológicas da terapêutica. 11 ed. Rio de Janeiro: Mc Graw Hill, 2006. 1821 p.
[10] CHEMICAL ABSTRACTS REACTION SEARCH SERVICE. Disponível em: <http://www.chem.ox.ac.uk/cheminfo/scifinder.html>. Acesso em: 20 de agosto de 2011.
[11] FARMACOPEIA Brasileira. 5 ed. Rio de Janeiro: Editora Fiocruz, 2010. 1448 p. [12] THE UNITED States Pharmacopeia. 34 ed. Rockville: The United States Pharmacopeial Convention, 2011. 4638 p.
[13] EUROPEAN Pharmacopeia. 7 ed. Convention on the Elaboration of a European Pharmacopeia, 2010. 3309 p.
[14] KHAN, U.; ASLAM, F.; ASHFAQ, M.; ASGHAR, M. N. Determination of Glimepiride in Pharmaceutical Formulations Using HPLC and First-Derivative Spectrophotometric Methods. Journal of Analytical Chemistry, v. 64, n. 2, p. 171-175, 2009.
[15] CHOWDARY, K. P. R.; SUNDARI, P. T. HPLC estimation of gliclazide in formulations and in pharmacokinetic studies. Asian Journal of Chemistry. v. 21, n. 7, p. 5221-5227, 2009.
[16] RAYANM, I. V.; RAO A. L.; RAMANA, M.V. Validated RP - HPLC Method for the Estimation of Glibenclamide in Formulation and Serum. International Journal of
Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences. v. 2, n. 2, p. 856-862, 2011.
[17] JIAN-YU, Z.; SU-FANG, T. RP-HPLC determination of the related substances in chlorpropamide. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis. 2010-09.
[18] VENKATESH, P.; HARISUDHAN,T.; CHOUDHURY, H.; MULLANGI, R.; SRINIVAS, N. R. Simultaneous estimation of six anti-diabetic drugs - glibenclamide, gliclazide, glipizide, pioglitazone, repaglinide and rosiglitazone: development of a novel HPLC method for use in the analysis of pharmaceutical formulations and its application to human plasma assay. Biomedical Chromatography, v. 20, p. 1043- 1048, 2006.
[19] LAKSHMI, K. S.; RAJESH, T. Development and Validation of RP-HPLC Method for Simultaneous Determination of Glipizide, Rosiglitazone, Pioglitazone, Glibenclamide and Glimepiride in Pharmaceutical Dosage Forms and Human Plasma. Journal of The Iranian Chemical Society, v. 8, n. 1, p. 31-37, 2011.
[20] DEEB, S. E.; SCHEPERS, U. Fast HPLC method for the determination of glimepiride, glibenclamide, and related substances using monolithic column and flow program. Journal of separation science. v. 29, p. 1571-1577, 2006.
[21] BRITISH Pharmacopeia 2011. London: The Stationary Office, 2011. 4019 p. [22] HARRIS, D. C. Análise Química Quantitativa. 7 ed. Rio de Janeiro: LTC, 2008. 886 p.
[23] THE BASICS OF THE KINETIC PLOT METHOD. Disponível em: <http://www.vub.ac.be/CHIS/Research/kp.html>. Acesso em: 01 de Abril de 2011 [24] SNYDER, L. R., KIRKLAND, J. J., GLAJCH, J. L. Practical HPLC method
development. 2 ed. New York: John Wiley & Sons, 1997. 765 p.
[25] RIBANI, M.; BOTTOLI, C. B. G.; COLLINS, C. H.; JARDIM, I. C. S. F.; MELO, L. F. C. Validação em métodos cromatográficos e eletroforéticos. Química Nova. v. 27, n. 5, p. 771-780, 2004.
[26] PATNAIK, P. Handbook of environmental analysis. 2 ed. New York: CRC press, 1997.
[27] AMPARO, M. R.; FRANZINI, C. D.; SCHIAVON, B.; CARVALHO, L. S.; de, NETO, A. J. S. Influência dos parâmetros instrumentais sobre o desempenho de coluna de HPLC com partículas superficialmente porosas sub-3 μm. Scientia
[28] MEYER, V. R. High-performance liquid chromatographic theory for the practitioner. Journal of Chromatography,v. 334, p.197-209, 1985.
[29] BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução RE no. 899, de 29
de Maio de 2003. Guia para validação de métodos analíticos e bioanalíticos. Diário Oficial da União, Brasília, DF, Poder Executivo, de 02 de Junho de 2003c.
[30] OLAH, E.; FEKETE, S.; FEKETE, J.; GANZLER, K. Comparative study of new shell-type, sub-2μm fully porous and monolith stationary phases, focusing on mass- transfer resistance. Journal of Chromatography A. v.1217, p. 3642-3653, 2010.