E. hirae ATCC 10541 foi selecionado como microrganismo teste para o método
turbidimétrico,
O meio de cultura preconizado pelos compêndios oficiais, para o doseamento de gramicidina (meio antibiótico nº3) interfere na atividade do antibiótico.
Com o meio para antibióticos no3, modificado (sem peptona de carne), foi observada atividade da gramicidina, que variou com sua concentração.
Com a substituição da peptona de carne por outras peptonas (triptona, casamino e lactalbumina) também se observou atividade gradual da gramicidina.
O caldo GCLT, meio desenvolvido no laboratório, foi capaz de promover o crescimento do microrganismo teste e não interferiu na atividade da gramicidina, sendo utilizado para o doseamento.
Um inóculo de concentração de 0,75% preparado a partir uma suspensão em salina de absorvância 1,0 0,1 foi adequado para realização do ensaio.
O tempo de incubação de 4 horas 15 minutos foi adequado e definido para a realização do doseamento.
Os resultados obtidos pelos delineamentos, 3x3 e 5x1, foram precisos, exatos e com veracidade adequada.
Uma curva analítica com adequada relação linear entre a porcentagem de inibição do crescimento e a concentração foi obtida na faixa de 0,08 a 0,88 µg/ml.
Fatores como tempo de incubação, idade do microrganismo e pH do meio de cultura interferem nos resultados, devendo ser controlados.
O método se mostrou seletivo, exato, preciso, com veracidade adequada e com limites de detecção, quantificação inferior e superior iguais a 0,06; 0,08 e 0,88 µg/ml, respectivamente.
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