O objectivo deste teste foi avaliar a influência do hidrogel de quitosano quando aplicado em queimaduras severas num modelo animal. Foram realizadas feridas por queimadura em ratos Wistar para avaliação do desempenho do hidrogel como penso para tratamento de feridas tendo em conta a variação do tamanho da ferida ao longo do tempo e o efeito da sua aplicação nos tecidos.
Uma das propriedades do hidrogel de quitosano, como já foi referido, é a sua capacidade de aderir a superfícies, mesmo quando são irregulares, o que se verificou durante a aplicação dos hidrogéis à superfície das feridas. Esta adesão é explicada pelas suas propriedades mecânicas mas também pelo facto de o quitosano ter cargas positivas e a pele ter cargas negativas (derivadas da membrana citoplasmática das células que constituem o tecido)(91). Os animais foram divididos em dois grupos: grupo controlo tratado com soro fisiológico (0,9%NaCl), e o grupo teste tratado com o hidrogel de quitosano.
A observação dos animais foi realizada ao fim de 2, 6, 9, 13, 15 e 21 dias com registo fotográfico. A avaliação do leito da ferida foi feita em termos qualitativos quanto ao aspecto da ferida em fase de cicatrização e quanto ao tamanho da ferida, como já descrito no Capítulo II.
Não se verificou durante os 21 dias de evolução qualquer processo de inflamação anormal e os animais apresentavam um comportamento normal. A
Capítulo III - Hidrogéis de Quitosano para o Tratamento de Feridas
69 Figura 3.27 apresenta a evolução da ferida induzida ao longo do tempo no grupo controlo e no grupo teste.
Figura 3.27 - Imagens da ferida no grupo tratado com o hidrogel (A) e no grupo controlo (B)
Macroscopicamente o tamanho de ferida do grupo de teste foi superior ao grupo controlo durante todas as observações efectuadas ao longo de 21 dias. A evolução do tamanho da ferida está representada na Figura 3.28. Através deste gráfico é possível observar que há um aumento inicial do tamanho da ferida no grupo controlo, enquanto no grupo de teste ocorre logo ao fim de 2 dias uma redução do tamanho da ferida. O tamanho da ferida no grupo teste é sempre estatisticamente inferior ao do grupo controlo até ao dia 9, a partir do qual deixa de existir diferença na área da ferida.
Figura 3.28 - Evolução do tamanho da ferida face ao tamanho inicial no grupo tratado com o hidrogel de
quitosano ( ) e no grupo controlo (
■
)O hidrogel tem um papel relevante nas fases iniciais de cicatrização da ferida ao manter uma redução do tamanho desta, sendo portanto relevante no processo de cicatrização e contribuindo
Dia 1 Dia 2 Dia 6 Dia 9 Dia 13 Dia 15 Dia 21
A B % ta m an h o d e fe ri d a dias
70
para uma recuperação mais rápida. No entanto, a presença do hidrogel não diminui o tempo total de cicatrização.
As imagens dos cortes histológicos realizados a partir do material recolhido da lesão induzida são apresentadas na Figura 3.29.
Figura 3.29 – Secções de biopsia coradas com hematoxilina e eosina para avaliação morfológica das lesões induzidas na pele do animal. Feridas tratadas com o hidrogel no dia 7, barra de escala 500 µm (A), dia 14, barra de escala 500 µm (C), e dia 21, barra de escala 200 µm (E). Ferida de controlo no dia 7, barra de escala 500 µm (B), dia 14, barra de escala 500 µm (D), e dia 21, barra de escala 500 µm (F). CH, hidrogel de quitosano; EP, camada epitelial; GT, tecido de granulação; NE, camada epitelial neo formada; WL, comprimento da ferida
A observação dos cortes histológicos com a respectiva coloração permite concluir que não ocorreu nenhuma reacção específica de inflamação ou granuloma, típico de reacção a corpo estranho, confirmando os resultados dos ensaios realizados anteriormente. Não foi observada a presença de microrganismos na lesão. Na necrópsia realizada aos animais não foram observadas histologicamente nenhumas anormalidades patológicas no cérebro, coração, fígado, pulmões e baço. Estes resultados confirmam a histocompatibilidade tanto ao nível local, através dos cortes histológicos apresentados, como ao nível sistémico, apoiado pela necrópsia realizada.
Os resultados de variação de tamanho de ferida sustentam a influência do hidrogel de quitosano no processo de cicatrização na ferida.
O hidrogel de quitosano tem um papel activo no processo de cicatrização, acelerando a diminuição do tamanho de ferida nas fases iniciais de cicatrização, nomeadamente na fase de hemostasia, inflamação e no início da fase de proliferação, tendo em conta os períodos a que correspondem os tamanhos de ferida inferiores aos de controlo. Este efeito diminui o risco de infecção pelo aparecimento da ferida e melhora significativamente o processo de cura da ferida. Na fase final de cicatrização da ferida, o hidrogel não demonstra vantagens significativas, o que poderá indicar que, apesar de não ter um efeito directo na fase plena de proliferação, e provavelmente início da fase de remodelação, melhora consideravelmente as condições no local
Capítulo III - Hidrogéis de Quitosano para o Tratamento de Feridas
71 da ferida, como por exemplo quanto ao nível de humidade, protecção contra agressões externas, pH, entre outras.
Estes resultados demonstram que a utilização de hidrogéis de quitosano para cicatrização de feridas por queimadura é vantajosa, acelerando o processo de cicatrização e diminuindo o risco de infecção pela diminuição significativa do tamanho de feridas nas fases iniciais de reparação da pele.
Os resultados histológicos dos tecidos adjacentes à aplicação do hidrogel na ferida, juntamente com os resultados obtidos nos ensaios de biocompatibilidade por implante subcutâneo, permitem observar uma diferença na reacção obtida. Enquanto no implante subcutâneo a histologia demonstrou a presença de reacção a corpo estranho, com um processo de inflamação e granulomas reactivos, no caso do ensaio de aplicação do hidrogel numa ferida este tipo de reacção não foi observada. O teste descrito aqui em último representa uma das aplicações clínicas do hidrogel de quitosano no tratamento de feridas. Em acréscimo a este resultado, a ausência de anormalidades patológicas em órgãos vitais, que não estavam em contacto directo com o hidrogel de quitosano, validam a segurança da utilização deste produto no tratamento de feridas.