A distribuição das características clínico-patológicas do tumor no grupo de pacientes foi já apresentada na tabela 2. Para avaliar a possível associação das variantes estudadas nos genes APC, AXIN2, CDH1 e GSK3β com as características clínico-patológicas foram calculados os valores de OR e significância através da regressão logística incondicional, estratificando o grupo de casos pela idade de aparecimento do tumor; o tipo, grau e tamanho do tumor; e da presença de metástase. No Anexo I, nas tabelas 17 a 21 estão representadas as distribuições dos genótipos das variantes analisadas com respeito às características clínico- patológicas do tumor, além dos valores de Odds Ratio (OR), Intervalo de Confiança (IC) e significância (p).
Historia Familiar do Câncer de mama
Para avaliar a relação entre os polimorfismos avaliados e o histórico familiar do câncer de mama, o grupo de pacientes com câncer de mama que fizeram parte deste estudo foi agrupado com relação à história familiar. No total foram encontradas 31 pacientes com familiares em primeiro e segundo grau, que padeciam de câncer de mama. Por outro lado, foram 41 pacientes que não tinham familiares com câncer de mama.
A distribuição completa dos genótipos das variáveis analisadas, segundo a história familiar de câncer de mama está sumarizada no Anexo I, Tabela 17. As variantes nos genes APC (rs465899) e AXIN2 (rs2240308) apresentaram diferenças significativas na distribuição dos resultados (χ2=6,274; gl=2; p=0,043 e χ2=10,616; gl=2; p=0,005; respectivamente) entre os grupos de estudo. Encontrou-se um aumento ao risco de desenvolvimento de câncer de mama em relação às variantes analisadas no gene AXIN2. Interessantemente, a variante rs334558 do gene GSK3 conferiu proteção ao desenvolvimento de câncer de mama no grupo de pacientes sem historia familiar desta doença.
Idade de detecção do câncer de mama
Para determinar o efeito das variantes genéticas estudadas sobre a idade de detecção do câncer, o grupo de pacientes com câncer de mama foi estratificado em dois grupos de acordo ao valor da mediana (63 anos). As pacientes com idade de detecção menor ou igual aos 63 anos de idade (n=56) e os pacientes que tiveram uma idade de detecção acima aos 63 anos de idade (n=46). Após a divisão, os grupos foram comparados com grupo controle. A distribuição das variantes genéticas dos genes reguladores de -Catenina avaliados neste estudo não mostrou diferenças significativas com respeito à idade de detecção do câncer de mama. No entanto, observou-se que o genótipo heterozigoto para a variante rs334558 do gene
GSK3β foi associado com o aumento do risco de desenvolver câncer de mama
antes dos 63 anos (OR=3,16; p= 0,004). No Anexo I, Tabela 18 estão representados os resultados completos da análise de associação entre as variantes genéticas e a idade de detecção do câncer.
Tipo de câncer de mama
O grupo de pacientes foi divido em três grupos dependendo da histogênese do tumor. O tipo mais abundante foi o Carcinoma Ductal Invasivo (n=80; 78,43%), seguido do Carcinoma Lobular Invasivo (n=14; 13,73%). O terceiro grupo foi constituído por pacientes com outros tipos de câncer de mama (n=8; 7,84%). Devido ao baixo número de casos de câncer diferentes ao Carcinoma Ductal Invasivo no grupo de pacientes, os resultados do efeito das variantes genéticas analisadas sobre o risco de desenvolver câncer de mama perderam poder de associação e apresentaram intervalos de confiança muito amplos. A distribuição dos genótipos entre os diferentes tipos histológicos de câncer de mama apresentou diferenças significativas para as variantes genéticas analisadas nos genes APC (χ2=18,701; gl=4; p=0,001), AXIN2 (rs2240308; χ2=10,102; gl=4; p=0,039; rs151278729;
χ2=18,701; gl=4; p=0,001), CDH1 (χ2=17,734; gl=4; p=0,001) e GSK3β (χ2=9,899;
gl=4; p=0,042) entre casos e controles. Destaca-se entre os resultados a associação no estado heterozigoto da variante rs5030625 do gene CDH1 com o risco de desenvolvimento de Carcinoma Lobular Invasivo (OR= 5,75; p=0,006). Os resultados completos da distribuição dos genótipos, valores de OR e significância estão relatados no Anexo I, Tabela 19.
Grau do câncer de mama
No grupo de pacientes foram encontradas mulheres nos 4 estágios do câncer de mama como foi apresentado na tabela 2. Foram realizadas análises de associação entre os genótipos e o grau do tumor. A distribuição dos genótipos entre os diferentes estágios do tumor apresentou diferenças significativas para os polimorfismos rs2240308 do gene AXIN2 (χ2=15,712; gl=6; p=0,015) e rs334558 do gene GSK3β (χ2=17,899; gl=6; p=0,006).
Destaca-se a associação encontrada entre o estado heterozigoto da variante rs334558 do gene GSK3β com o risco de desenvolvimento do câncer de mama em estágios mais avançados (III e IV). O risco aumenta concomitantemente com o estágio do câncer, sendo de 13 vezes (OR=13; p=0,017) para o estágio III e 23 vezes (OR=23; p=0,031) para o estágio IV. Os resultados completos da distribuição genotípica, valores de OR e significância são apresentados no Anexo I, Tabela 20.
Tamanho do tumor
Outra das variantes patológicas analisadas foi o tamanho do tumor. Considerando a classificação do tumor, o grupo de pacientes com câncer mama foi dividido em pacientes com classificação T1 (n=45), T2 (n=40) e T3 (n=17). A análise de associação foi usada para identificar diferenças da distribuição dos genótipos entre os tipos de tumor. Foram encontradas diferenças significativas na distribuição dos genótipos da variante rs334558 do gene GSK3β com respeito à classificação do tamanho do tumor (χ2=16,4002; gl=4; p=0,003).
O polimorfismo rs334558 do gene GSK3 foi associado com o risco de desenvolver câncer de mama; o estado heterozigoto (T/C) do polimorfismo apresentou um aumento do risco de desenvolver câncer de mama diretamente proporcional ao tamanho do tumor. A regressão logística incondicional determinou um risco aumentado de 3 vezes (OR=3,0; p=0,017) para a categoria T2 e 15 vezes (OR=15,0; p=0,01) para a categoria T3. Os resultados completos da distribuição dos genótipos, valores de OR e significância são apresentados no Anexo I, Tabela 21.
Metástase
No grupo de pacientes foram observadas 11 mulheres com metástase (10,78%). As análises de associação identificaram que a variante estudada no gene
GSK3β apresentou distribuição dos genótipos estatisticamente diferente entre as
pacientes com metástase e sem metástase (χ2=8,631; gl=2; p=0,013). Este polimorfismo em estado heterozigoto foi associado com risco ao câncer de mama metastático (OR=23; p=0,031). Os resultados completos são apresentados no Anexo I, Tabela 20 (Grau IV).
Receptores Hormonais
A análise histopatológica do tumor avalia a presença dos receptores de estrogênio (RE), progesterona (RP) e epidermal humano 2 (HER2), pois podem indicar um prognostico desfavorável no desenvolvimento da doença. Como foi apresentada na tabela 2, a maior parte dos tumores no grupo de pacientes deste estudo mostraram RE e RP positivos (88,2% e 82,4%; respectivamente).
No grupo de pacientes com tumores RE e RP positivo observou-se a mesma tendência da distribuição dos genótipos que no grupo completo. O polimorfismo
rs2240308 do gene AXIN2 mostrou diferenças significativas em relação ao grupo controle. A presença do polimorfismo foi relacionada com o risco de desenvolvimento de câncer de mama, tanto no estado homozigoto como heterozigoto. Os valores de OR, significância e a distribuição genotípica dos polimorfismos são apresentados no Anexo J, Tabela 22.
Finalmente foi analisado o efeito do status do HER2 com os polimorfismos avaliados. A avaliação histopatológica permitiu estratificar o grupo de pacientes com câncer de mama em dois subgrupos, o primeiro formado pelas pacientes com tumores HER2 negativo e o segundo formado pelas pacientes com tumores HER2 positivos. Não foram encontradas diferenças significativas na distribuição dos genótipos segundo o status do HER2. Como já foi relatada para o grupo de pacientes, a variante rs2240308 do gene AXIN2 foi associada com o risco de desenvolvimento de câncer de mama, independente do status do receptor. Os resultados completos estão representados no Anexo J, Tabela 23.
4.4 Status de metilação das CpGs nas regiões promotoras dos genes