Os achados histológicos são mostrados nas figuras 5 a 8. Os achados mais frequentes nos cortes histológicos do fígado dos ovinos do grupo G1 não evidenciaram alterações no tempo controle, aos 7 e 14 dias do consumo de sementes, T1 e T2 respectivamente. Já aos 21 e 28 dias (T3 e T4) após a inclusão de sementes, os animais apresentaram discretas alterações no fígado, como degeneração hidrópica
Grupo T0 T1 T2 T3 T4
G1 10±7aAC 8,4±11,2aA 7,2±5,2aAC 3,4±2,8aBC 5,6±6,4aC
G2 11±6aA 6,2±5bAB 6±3,8aAB 4,6±3,8aB 6±3,8aB
difusa, infiltrado polimorfonuclear multifocal, degeneração gordurosa difusa, infiltrado mononuclear multifocal e centro-lobular.
No grupo com 0,6 % de sementes, G2, evidenciou-se durante os cinco momentos avaliados, uma discreta degeneração hidrópica difusa, infiltrado inflamatório polimorfonuclear de apresentação multifocal e degeneração gordurosa difusa e multifocal. Destaca-se que em um animal do G2 no T1 foi observado um infiltrado polimorfonuclear periportal acentuado, proliferação dos ductos biliares com fibrose e moderada necrose multifocal (Figura 5). Achados estes compatíveis com o descrito por DANTAS et al. (2004), na intoxicação crônica espontânea por C. retusa em ovinos, que observaram fibrose periportal e proliferação de ductos biliares. Lemos & Barros (1998) em bovinos, Nobre et al (2004) na intoxicação por C. retusa em eqüídeos e Nobre et al (2005) na intoxicação por C. retusa em ovinos descreveram que existem diversos padrões de degeneração e necrose dos hepatócitos.
Neste mesmo G2 aos 14 dias de consumo das sementes (T2) foi observado apenas em um animal infiltrado inflamatório polimorfonuclear moderado, degeneração gordurosa, grandes áreas de necrose multifocal moderada, com infiltrado inflamatório polimorfo e mononuclear multifocal difuso (Figura 6), concordando com os achados descritos por ILHA et al (2001) na ocorrência de um surto de intoxicação espontânea por Senecio brasiliensis em ovinos, que incluem graus variáveis de degeneração hepatocelular caracterizada pelo acúmulo de numerosas gotas lipídicas no citoplasma das células hepáticas e presença de lisossomos carregados de material eletrodenso que, na maioria dos casos, correspondem à lipofuscina-ceróide.
Figura 5. Fotomicrografia do fígado de ovino do G2 no 7° dia de intoxicação (T1), ilustrando a presença de infiltrado polimorfonuclear periportal acentuado (cabeça da seta negra), proliferação dos ductos biliares com fibrose (seta negra). Coloração HE aumento de 400X.
No grupo com maior inclusão de sementes grupo G3, em um ovino no T2, constatou-se infiltrado inflamatório mononuclear periportal acentuado, multifocal moderado e necrose multifocal discreta (Figura 7), diferindo do encontrado por Nobre et al (2005), que relataram lesões histológicas no fígado caracterizadas por necrose centrolobular.
Todos os animais dos grupos experimentais, excetuando-se os dos tempos controle, apresentaram algum tipo de infiltrado inflamatório mononuclear ou polimorfonuclear e degeneração hidrópica (Figura 8), caracterizando inflamação do parênquima hepático.
Figura 6. Fotomicrografia de ovino G2 no 14° dia de intoxicação (T2), ilustrando a presença de moderado infiltrado inflamatório mononuclear multifocal (cabeça da seta negra), degeneração gordurosa difusa discreta (cabeça da seta branca), uma grande área de necrose multifocal moderada (seta branca). Coloração HE, aumento de 400X.
Nobre et al (2004), Nobre et al (2005), Boghossian et al (2007) e Souza et al (2007) relataram a megalocitose dos hepatócitos como um achado comumente observado na intoxicação por alcalóides pirrolizidínicos. Estes apresentaram citoplasma e núcleo amplos e cromatina condensada localizada na periferia do núcleo. Achado este que não foi constatado neste estudo, podendo-se sugerir que as diferentes doses e tempo de exposição ao tóxico não foram suficientes para provocar tal alteração.
Figura 8. Fotomicrografia de ovino do G3 no14° dia de intoxicação (T2), ilustrando a presença de infiltrado inflamatório mononuclear periportal acentuado (cabeça da seta), degeneração hidrópica (seta negra). Coloração HE, aumento de 400X.
Figura 7. Fotomicrografia de ovino do G3 no14° dia de intoxicação (T2), ilustrando a presença de infiltrado inflamatório mononuclear acentuado (cabeça da seta),e polimorfonuclear multifocal discreto (seta negra), área de necrose (seta branca). Coloração HE, aumento de 400X.
6. CONCLUSÕES
• Os ovinos intoxicados experimentalmente com sementes de C. spectabillis quando trituradas e incorporadas na ração nas porcentagens de 0,2%, 04% e 0,6%, apresenta sinais clínicos leves de toxicidade.
• Hemograma e provas de função hepática não tem valor diagnóstico na intoxicação por C.spectabillis em ovinos, fazendo-se necessário a realização de exames complementares como a ultrassonografia e a biópsia hepática percutânea.
• As lesões hepáticas histológicas são compatíveis com hepatotoxicidade, porém não suficientes para alterar as atividades séricas das enzimas gamaglutamiltransferase, aspartato aminotransferase e creatina fosfoquinase.
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APÊNDICE
A- SOLUÇÕES EMPREGADAS NA ELETROFORESE (SDS-PAGE)