5.6.1 Grãos de pólen e esporos
As operações de abertura e coleta de sub-amostras do testemunho sedimentar da Lagoa do Macuco foram realizadas no Laboratório de 14C do CENA-USP. O testemunho foi aberto por meio de um corte longitudinal e separado em duas metades. As sub-amostras, constituídas por 1 cm3 de sedimento, foram colhidas em intervalos de dois centímetros ao longo do testemunho e acondicionadas em frascos de acrílico identificados. Ao final, o material foi guardado em geladeira.
O tratamento polínico utilizado baseou-se no método apresentado por Colinvaux et al. (1999). As sub-amostras foram submetidas a tratamento físico-químico para promover a concentração dos grãos de pólen e esporos presentes no sedimento lacustre. As centrifugações mencionadas entre cada etapa do processo descrito a seguir foram realizadas a 3000 rpm durante três minutos.
Inicialmente, as sub-amostras foram transferidas para tubos de centrífuga identificados, com capacidade para 15 ml. A cada sub-amostra, foram adicionadas concentrações conhecidas de um marcador exótico, conforme metodologia estabelecida por Benninghoff (1962). Para tanto foram utilizadas em cada sub-amostra duas pastilhas de Lycopodium, cada uma com concentração média de 18583 grãos, adquiridas junto ao Departamento de Geologia da Universidade de Lund, na Suécia. Foram adicionados cerca de 5 ml de HCl 10% para a dissolução das pastilhas. O material contido em cada tubo foi homogeneizado e centrifugado.
A adição do marcador exótico é necessária à realização da análise polínica absoluta, que tem por premissa o conhecimento do número de grãos de pólen contidos em um volume conhecido de sedimento.
Após lavagens com água desionizada, foram adicionados 10 ml de HF 48% a cada sub-amostra. A reação com o ácido foi realizada em banho-maria, a cerca de 90° C, durante 30 minutos. Após, completou-se o volume dos tubos com solução de HCl 10% e procedeu-se a centrifugação, o descarte do material em solução e a lavagem com água desionizada. O ataque com HF promove a dissolução da sílica presente no sedimento. A solução de HCl permite a remoção da sílica coloidal e de fluoretos de sílica.
A seguir as sub-amostras foram submetidas a um banho-maria em solução de KOH 5% durante três a cinco minutos. Após centrifugação a solução foi descartada e o material lavado com água desionizada. Um ataque de KOH a quente, permite a remoção de ácidos húmicos do sedimento.
As sub-amostras foram desidratadas com HAc e, posteriormente, acetolisadas em solução constituída por nove partes de (CH3CO)2O e uma parte de H2SO4 concentrado (total de 10 ml) em banho-maria a cerca de 90° C, durante 15 minutos. Após, o volume de cada tubo de centrífuga foi completado com HAc para redução da força reativa da solução. As sub- amostras foram centrifugadas e a solução descartada. Os objetivos principais da acetólise são a remoção da celulose presente no sedimento e a coloração dos grãos de pólen e esporos.
Na seqüência as sub-amostras foram lavadas com água desionizada e desidratadas com etanol absoluto. Após centrifugação, o excesso de etanol foi removido e o resíduo sedimentar resultante homogeneizado com a adição de algumas gotas de glicerina bidestilada, seco em estufa a 50° C para remoção do etanol ainda presente e acondicionado em frascos de acrílico identificados. O material foi guardado em geladeira para posterior montagem das lâminas de microscopia. O processo de desidratação das sub-amostras propicia um maior tempo de vida útil às lâminas de microscopia utilizadas na análise polínica.
Após o tratamento físico-químico foram montadas lâminas de microscopia óptica para todas as sub-amostras do testemunho MAC-C. O meio de montagem utilizado foi glicerina líquida. O resíduo foi colocado sobre a lâmina em um espaço delimitado por parafina. A lamínula foi vedada em suas bordas e identificadas com o código de cada sub-amostra.
A leitura dos palinomorfos encontrados (grãos de pólen e esporos) foi realizada em um microscópio Zeiss Axisokop 40, com objetiva Achroplan 100x. A identificação com base em comparações com as coleções de referência do Laboratório de 14C do CENA/USP e do
amostra. Foram contados todos os grãos de pólen e esporos encontrados e também todos os esporos de Lycopodium marcador até se atingir um mínimo de 300 grãos de pólen identificados como pertencentes a táxons arbóreos.
A partir dos dados obtidos pela contagem e identificação dos tipos polínicos, foram utilizados os softwares Tilia e Tilia Graph View para a confecção de diagramas de concentração relativa (%), concentração absoluta (grãos/cm3) e taxa de acumulação polínica (grãos/cm2/ano, conforme Davis e Deevey Jr., 1964). A concentração relativa foi calculada com base na soma total de grãos de pólen (inclusive plantas aquáticas) e esporos. A delimitação das zonas polínicas foi realizada com o programa CONISS (GRIMM, 1987) com base em todos os táxons, exceto os tipos indeterminados. A nomenclatura dos táxons de angiospermas foi baseada em APGII.
5.6.2 Diatomáceas
As sub-amostras para análises de diatomáceas também foram coletadas em intervalos de 2 cm ao longo do testemunho sedimentar da Lagoa do Macuco. As sub-amostras, constituídas por 1 cm3 do sedimento, foram acondicionadas em frascos identificados.
O tratamento para extração das diatomáceas consistiu em reagir as sub-amostras com peróxido de hidrogênio (H2O2) 30 volumes, a cerca de 50° C, até o término da reação para a remoção da matéria-orgânica. Em seguida as sub-amostras foram lavadas com água desionizada até se obter um pH próximo ao neutro. Posteriormente as sub-amostras reagiram com HCl 10% a cerca de 50° C. Ao final foram realizadas novamente lavagens com água desionizada até um pH próximo ao neutro. Após o tratamento os resíduos foram acondicionados em frascos de acrílico com água desionizada, e mantidos em geladeira.
Para montagem das lâminas de microscopia, pequenas quantidades dos resíduos foram pipetadas sobre lamínulas e deixadas para secar em temperatura ambiente. Uma gota de Naphrax foi colocada sobre uma lâmina pré-aquecida e sobre ela foi colocada a lamínula com o resíduo seco. A lâmina foi colocada sobre uma chapa aquecedora, a uma temperatura não maior que 50° C, e a lamínula foi pressionada para remoção das bolhas.
A análise de diatomáceas foi realizada apenas em algumas sub-amostras e foi restrita a um levantamento qualitativo de alguns tipos encontrados.
6 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Inicialmente são sintetizadas informações sobre as coletas realizadas em cada ponto de amostragem. Os pontos são agrupados conforme a fisionomia da vegetação de cobertura, isto é, pontos sob fitofisionomia florestal e pontos sob fitofisionomia não-florestal. O ponto MAC, Lagoa do Macuco, é tratado à parte, devido à natureza do substrato amostrado (sedimento lacustre).
Em seguida são apresentados, discutidos e interpretados os resultados de cada grupo. Primeiramente os pontos sob floresta, em seguida os pontos sob fitofisionomia não-florestal e, ao final o ponto MAC (Lagoa do Macuco).
Ao final do tópico ‘resultados e discussão’ é apresentada a integração dos dados, quando os resultados dos três grupos são interpretados em conjunto, com foco na dinâmica da vegetação, nas flutuações do nível relativo marinho e nos paleoclimas holocênicos.