Betydningen av verdinettverket for verdiskapning

O planejamento experimental é uma parte fundamental para o desenvolvimento da metodologia e uma ferramenta de extrema importância para avaliar quais são os fatores que mais influenciam no método. Este parâmetro de qualidade pode ser visto também como um teste de robustez do método para observar a variação dos fatores que o método suporta sem ter seus resultados alterados.

Para o seu desenvolvimento averiguou-se qual é o fator que tem maior influência na validação em um processo multiresíduo, neste caso observou-se que a recuperação é de maior significância, assim foi definido os fatores que poderiam interferir nesse parâmetro. Seguindo a rotina do QuEChERS original, observou-se que o solvente de trabalho na extração liquído- liquído ou liquído-sólido é um importante fator, assim como a quantidade de massa de Cloreto de Sódio (NaCl) no aumento da força iônica, quantidade de Sulfato de Magnésio (em

33 ambas as fases, extração líquido-sólido e dSPE) e a quantidade de PSA (Primary-Secundary Amine). Todos estes fatores são essenciais na técnica original, mas deve-se atentar para a complexidade da matriz, ou seja, o grau de interferentes existentes.

Desta forma, foi realizado um planejamento experimental para analisar os fatores que influenciam na técnica QuEChERS, ou seja, qual o grau de influência direta na metodologia, como seus sais e suas quantidades, e desta forma obter os melhores dados possíveis de recuperação.

Figura 7: Diagrama de Ishikawa para planejamento experimental da técnica QuEChERS.

Com os fatores estabelecidos foi utilizado Software Statistica 7 para determinação da aleatorização dos experimentos para evitar erros sistemáticos, foi realizado um planejamento completo 23 com três pontos centrais para observação do desvio padrão. No início dos estudos, se tratando de vários fatores (massa matriz, volume solvente e os sais de trabalho) foi realizado um planejamento univariado com alguns dos fatores (massa da matriz e volume do solvente) e depois da otimização destes fatores foi estabelecido a fixação do Sulfato de magnésio (retirada de água residual), pois se trata de um reagente barato e por considerar que a matriz continha pouca água residual. Estas escolhas foram satisfatórias como mostradas posteriormente nos resultados. O planejamento foi comparado com planilhas de Excel para confirmação dos resultados obtidos como garantia da qualidade do procedimento (Apêndice B) dentro de um nível de confiança de 95%.

34 3.1.1.2. Parâmetros para validação

A utilização de um bom planejamento evita o retrabalho das análises laboratoriais, além de economizar recursos que muitas vezes são limitantes das análises, como amostras ambientais e amostras na área de pericia criminal, estruturando assim um estudo integrado interagindo com uma multiplicidade de fatores, como a parte cultural, econômica, ambiental e social. Após este passo foi realizado análise dos parâmetros que tem influência direta na análise, com isso destaca-se que apesar de vários parâmetros serem exigidos dentro da SANCO/12495 e até mesmo na DOC-CGCRE-008 do INMETRO, e considerando o guia de validação do MAPA (MAURICIO et al., 2011) que também é baseado nestes documentos, destaca-se que há orientação de que alterações nos parâmetros e critérios de validação podem ser necessários devido a especificidade de cada laboratório.

Foi definido que se tratando de uma técnica de extração, um dos fatores de extrema importância a ser avaliado, é a recuperação/exatidão e que este deve estar entre 70 e 120%, a precisão não deve exceder 20% no coeficiente de variação (CV). Foi analisado também a linearidade/sensibilidade do método, que não deve ter resíduo superior a 20% e coeficiente de determinação acima de 0,98, bem como proposta a inserção de cálculo de incerteza para sua avaliação. As extrações foram realizadas com o efeito da matriz e posteriormente fortificadas com os 5 pontos exigidos e com as respectivas 6 replicatas para cada ponto, foi realizado também análise da repetibilidade da metodologia e por fim o cálculo da incerteza do método. Todos estes parâmetros foram definidos conforme exigência do guia SANCO.

35 Figura 8: Fluxograma do processo de trabalho para aplicação das ferramentas da qualidade.

3.1.1.2.1. Recuperação/Exatidão

Exatidão é a concordância entre o valor verdadeiro do analito na amostra e o extraído no processo analítico e é um dos parâmetros chaves apara validação de metodologia. O processo se baseia em quatro métodos principais:

- Comparação do método proposto com um método de referência; - Uso de ensaios de recuperação na matriz;

- Estudos colaborativos;

- Uso de material de referência certificado (MRC).

Sabe-se que a melhor forma para realização deste parâmetro é a utilização de material de referência, pois esta envolvido diretamente com padrões internacionais, garantindo assim a

36 rastreabilidade do método. A amostra é analisada e seu valor de recuperação é comparado com o valor certificado pelo produtor do MRC. O grande problema da utilização deste material de referência é o seu alto custo e a limitação de amostras com a matriz e analito de interesse (BRITO et al., 2003), além da faixa de concentração desejada. Fator que já esta se alterando no país com a acreditação de produtos de MRC pelo INMETRO. Este fator abre portas para o surgimento de novos MRC no país conforme a demanda.

A exatidão pode também ser obtida pela comparação dos dados obtidos com um outro método já validado. Após análise de diferentes amostras, as diferenças obtidas para cada amostra são calculadas e comparadas com o valor desejado. Entretanto nem sempre se encontra método de referência preexistente, impossibilitando a utilização deste procedimento. O desenvolvimento por estudos colaborativos é conduzido com a aceitação do desenvolvimento do método com outros laboratórios, com um mínimo absoluto de 5 participantes. O grande problema desta metodologia é manter a exatidão do método já que o estudo envolve a estabilidade do composto, o que torna uma tarefa difícil quando se trata de compostos com certo grau de volatilidade ou degradação. Neste processo de validação utiliza- se análise de variância (ANOVA) para determinação de diferença significativa entre os laboratórios envolvidos.

O ensaio de recuperação constitui o método mais utilizado em validação de processos analíticos, e a recuperação esta relacionada com a exatidão, pois reflete a quantidade de analito recuperado em relação à quantidade real presente na amostra. A exatidão é expressa em porcentagem e podem possuir erros sistemáticos inerentes ao processo, como perda da substância, medidas volumétricas imprecisas, interferentes na amostra, entre outros fatores. (BRITO et al., 2003).

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