Nr. 3/79
BAKTERIOLOGISK/HYGIENISR UMDERSØKFLSE AV' FISKEOPPDRETTSANLEGG
J a n Gjerde
F i s k e r i d i r e k t o r a t e t
Bergen September 1999
FOROrn
A r b e i d e t b l e u t f o r t ved V i t a m i n i n s t i t u t t e t l975 med at@tte r y a h!
SAMMENDRAG
A r b e i d e t o m f a t t e r b a k t e r i o l o g i s k e u n d e r s @ k e l s e r a v vatfOu for oppdr f i s k , sjØvannet i oppdrettsmærer og v i d e r e i s o l e r i n g a v f e c a l e b a k t e i i = r t r a Fr r^.:
o p p d r e t t s a n l e g g . A r b e i d e t e r Ledd i å f å bedre kjennskap til de b a k i r r j o i o g 5 -:
h y g i e n i s k e fokhold som oppdrettsnæringen a r b e i d e r under, Det b l e f n m t L
...
1?.1;--ier i e r a v f e c a l o p p r i n n e l s e v a n l i g kan p å v i s e s i o p p d r e t t s a n l e q g e n e . Disse D S - . ~ - \ ~ I . -
e r i n n g å r ved b a k t e r i o l o g i s k s t a n d a r d i s e r i n g a v matvarer g e n e r e l t , V e d sarmmc !LI<
n i n g med sjØvann u t e n k j e n t o r g a n i s k f o r u r e n s i n g b l e d e t i m i d l e r t i d I l i X e på-_ -;l @k
-
n i n g i oppdrettsmærene a v de Øvrige b a k t e r i e g r u p p e r som inngikk i n n c i e r ~ @ i i l , - I ~ ~ ~ ~ ~ ~
INNLEDNING
E t o p p d r e t t s a n l e g g f o r f i s k v i l medfore Øket o r g a n i s k be2astni.n- i u?> -.- jØet. P å e t r e l a t i v t b e g r e n s e t volum a v s t e n g e s s t o r r e fiskemengdex som spesielt t
L-,, ,--b 8
sommerhalvåret f o r e s i n t e n s i v t . Ved o p p d r e t t i akvarium er d e t f u n n e t a t ?i.Gic.-/-i:
og f i s k e a v f Ø r i n g som t i l f Ø r e s vannet kan t j e n e som næringsemne f o r e n rekke a v b a k t e r i e r , og derved (zike b a k t e r i e i n n h o l d e t i vannet { G å l m u r eisi. a l , 19751, b a k t e r i e v e k s t g e n e r e l t kan også g i m u l i g h e t e r f o r a k e t a n t a l l patensielle patuyt>-iio b a k t e r i e r f o r f i s k e n . På l i n j e med husdyrhold f o r @ w i g v i l sannsyat:?ig de h y ~ i e - - n i s k e f o r h o l d i f i s k e n s m i l - j @ v i r k e i n n på h e l s e t i l s t a n d e n i anleggeile, og vli dere produktenes anvendelse som matvarer. Ved b a k t e r i o l o g i s k u.nders@ke:kse av rna-*rarer og vann u t f r a en h y g i e n i s k v u r d e r i n g b e n y t t e s r u t i n e m e s s i g e unders@keicer f o r d i k a t o r b a k t e r i e r e l l e r grupper a v b a k t e r i e r som kan ha helsemessig b e t y d n i n g , Undersakelser f o r bakteriegruppene f e c a l e s t r e p t o k o k k e r , c o l i f o r m e balaterier, f e c a l c o l i f o r m e i n k l u s i v e E s c h e r i c h i a c o l i , coagulase p o s i t i v e ctaphyl,okoleker co??
grupper a v c l o s t r i d i e r h a r v æ r t h e n s i k t s m e s s i g ved v u r d e r i n g a v bakte ~:i.ral.ogisi~:
k v a l i t e t f o r matvarer g e n e r e l t (Thatcher and Clark 1 9 6 8 ) . Med unntak a v v i s s ( - : s e r o t y p e r a v E s c h e r i c h i a c o l i (Ewing e t a l . 2-95?) regnes d i s s e f o r apatogene :;;sd l a v forekomst. Påvisning av d i s s e grupper kan i m i d l e r t i d i n d i k e r e forekomst:. av patogene b a k t e r i e r , f e e k s , Salmonella (Claudon e t a l . 197x1,
Fiskens b a k t e r i e f l o r a på s k i n n , g j e l l e r og i tarmen e s nær r e - til f i s k e n s m i l j a (Shewan 1 9 6 1 ) , For o p p d r e t t s f i s k viL derved f o r e t som v e s e n t l i g grad kunne i n n v i r k e p& Eiskens b a k t e r i e f l o r a , Undersakelser
b a k t e r i e r som t i l h a r e r f a m i l i e n E n t e r o b a c t e r i a c e a e normal t i k k e f i n n e s i L n hos f i s k , og p å v i s n i n g a v s l i k e b a k t e r i e r hos n y f a n g e t f i c k e r i n d i k a s j o n pa Q 7 o . i ' l;
f o r u r e n s i n g i f i s k e n s m i l j@ (Geldreich and Clarke 1966, Zobell 1941)
.
Vidr*undersØkelser v i s e r a t f i c k som Lever i e t miljØ hvor humanpatogene b a l e t e r ~ e b a k t e r i e r som E s c h e r i c h i a c o l i p å v i s e s , kan danne a n t i s t o f f e r mot d i s s e bai",
(Jansen and Meyer 1968, T r o a s t 1 9 7 5 ) . D e t t e i n d i k e r e r a t f i s k a k t i v t kan %nf; ;c $ %
med d i s s e b a k t e r i e a r t e r , e l l e r a t a n t i s t o f f dannelsen i f i s k h a r skjedd p& ( a - 1 , 7 - ~ , 1 :
a t f i s k e n s g j e l l e r e r k o m e t i nær k o n t a k t med b a k t e r i e n e , U t f r a d i s s e i ~ r a d ~ ~ ~ d ~ ~ ~ e l s e r e r d e t t i n g som t y d e r på a t f i s k kan være r e s e r v o a r e l l e r v e r t fos: RaXf
-
i - j f - ~a v humanpatogen betydning,
Ved b a k t e r i o l o g i s k undersØltelse a v sjØvann i o p p d r e t t s m r e r e r r\ t- r q - i -
a k t u e l t å t a andre b a k t e r i e g r u p p e r med i vurderingen. Ved t i l f a r s e l a v orgzrt -'t m a t e r i a l e som t i l f e l l e t e r i e t f i s k e o p p d r e t t , v i l muligheten f o r p r o s e n t v i s .i : ;q a v a n t a l l p r o t e o l y t i s k e og s t i v e l s e s s p a l t e n d e b a k t e r i e r være til s t e d e (Banqiihr -q Bonde 1973, Rheinheimer 1 9 7 0 ) . B a k t e r i e r som i n n g å r i nedbrytningen a v de" 9 - Q C -
n i s k e a v f a l l e t i d e t marine miljØ i k a l d e r e farvann e r i overveiende gram - r J ; 8
s t a v e r . Disse grupper e r v a n l i g v i s saprophytære organismer s e l v om grupper d i s s e b a k t e r i e r s p e s i e l t i n n e n f o r genera V i b r i o o g Aeromonas h a r w r t årsdk r # L
infeksjonssykdommer hos f i s k og s k j e l l (Simudo og Kaneko 1 9 7 3 ) .
U t f r a d i s s e f o r h o l d t o k denne unders@kelsen s i k t e på å p å v i s e t r *-r komcter a v b a k t e r i e g r u p p e r i. f i s k e n s miljØ som kan ha hygienisk betydning i:'-
v i d e r e f o r e d l i n g a v f i s k e n til konsum, og o m f a t t e r undexsØkelser a v c o l l f i ; ~ ~ ? t e r i e r , f e c a l c o l i forme og f e c a l e s t r e p t o k o k k e r i f l s k e f o r e t , s jØvamet 03
o v e r f l a t e og tarminnhold, Videre b l e d e t sØkt å k a r t l e g g e b a k t e r i e g r u p p e c r .ai:
i n d i k e r e @ k e t organisk b e l a s t n i n g g e n e r e l t . h denne vurderingen i n n g å r t c T r " 5.11 1 "
levende b a k t e r i e r , p r o t e o l y t i s k e b a k t e r i e r , s t i v e l s e s s p a l t e n d e b a k t e r i e r oy ?-n7 6 -
komst a v v i b r i o b a k t e r i e r o g hæmolytlske b a k t e r i e r ,
M a t e r i a l e og metoder
Det b l e valgt; u t t r e o p p d r e t t s a n l e g g som l å s l i k til a t pr@ve"?e I I ~ L ~ t r e t i m e r e t t e r u t t a k v a r sådd u t . Oppdrettsanleggene v a r b a s e r t på flyterner S t a r r e l s e n på anleggene r e p r e s e n t e r t e d e t en v a n l i g kan f i n n e ved kommersjr!i f i s k e o p p d r e t t , E t t a v anleggene v a r svært l i t e , nærmest hobbybrulc ( A ) , $t z v leggene v a r i mellonigruppen hvor 2 mann var sysse1sat.t ( B ) , og d e t t r e d j e t7e-e:
.*I
s t a r r e anlegg med b l a n s a t t e i sommerhalvåret ( C ) , S t Ø r r e l s e n på fiskemengc7 2
de u l i k e a n l e g g til trver t i d v a r v a n s k e l i g å beregne på grunn a v s l & t i n q c\-
Øvrig r a s k v e k s t p& f i s k e n , B e l i g g e n h e t e n a v a n l e g g e n e v a r i avskjermende v i k e r e l l e r f j o r d a r m e r , Som r e f e r a n s e r b l e d e t t a t t u t prØver f r a sjØvann u t e n u t s l i p p f r a k j e n t e f o r u r e n s i n g s k i l d e r ( D ) , o g sjØvann f r a e n b e t y d e l i g k l o i l k k f o m r e n s e t f j o r d a r m ( E ) . R e f e r a n s e s t e d e n e l å i n n e n f o r samme a v s t a n d f r a l a b o r a t o r i e t som o p p d r e t t s a n l e g g e n e .
I. B a k t e r i o l o g i s k undersØkelse a v f e r d i g b l a n d e t v å t f 6 r
Underscbkelsen o m f a t t e r 62 prØver a v f e r d i g b l a n d e t v å t f 6 r - PrØvemateri- a l e t e r f o r d e t meste i n n h e n t e t ved besØk i o p p d r e t t s a n l e g g . En d e l a v p r a v e m t e - r i a l e t er i n n s e n d t n e d f r o s s e t til l a b o r a t o r i e t . PrØvetakingen i a n l e g g e n e h a r f o r e - g å t t ved a t prØver på c a . 1 k g b l e u t t a t t a s e p t i s k i s t e r i l e p l a s t p o s e r o g s t r a k s b r a k t til l a b o r a t o r i e t f o r b a k t e r i o l o g i s k undersØkelse. De i n n s e n d t e Erosne f 6 r - prØvene b l e fØr den b a k t e r i o l o g i s k e undersØkelsen t i n t i k j Ø l e s k a p i c a , 15 t i m e r . F r a ' h v e r f6rprGve b l e d e t v e i d u t 3 p a r a l l e l l e r h v e r p å 10 g masse som b l e f o r t y n - n e t med 0,l % peptonvann o g homogenisert i e n Serva11 omnimixer i 2 m i n u t t e r , Prevene b l e v i d e r e f o r t y n n e t i e n d e k a d i s k f o r t y n n i n g s r e k k e . Av p a s s e n d e f o r t y n - n i n g e r b l e d e t t a t t u t prØver til d e f o r s k j e l l i g e t e s t e n e ,
1. T o t a l a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . g b l e b e s t e m t ved i n n s t Ø p n i n g i P l a t e c o u n t a g a r (Oxid CM 1 8 3 ) . P a r a l i e l t i n o k u l e r t e s k å l e r b l e i n k u b e r t a e r o b t ved 3 7 O ~ i 48 t o g ved 2 0 O ~ i 72 t (N.M.K. n r , 8 6 , 1 9 7 2 ) ,
2 . C o l i forme b a k t e r i e r , f e c a l c o l i forme b a k t e r i e r med i d e n t i f i k a s jon a v E c c h e r i c h å a c o l b . For bestemmelse a v d i s s e b a k t e r i e g r u p p e r b l e p r o s e d y r e n f o ~ e - s k r e v e t a v A s s o c i a t i o n o f O f f i c i a l A n a l y t i c a l Chemists 1970 (AOAC) b e n y t t e t . I
denne p r o s e d y r e n bestemmes d i s s e b a k t e r i e g r u p p e r e t t e r p r i n s i p p e t "Most P r o b a b l e Number". E s c h e r i c h i a c o l i i d e n t i f i s e r e s ved b i o k j e m i s k d i f f e r e n s i e r i n g e t t e r r e - a k s j o n e n i I n d o l medium, MetylrØdt medium, Voges P r o s k a u e r o g C i t r a t medium (LMVC).
For bestemmelse a v d e c o l i f o r m e b a k t e r i e r b l e L a u r y l s u l p h a t e b r o t h (Merck n r . 10266) b e n y t t e t . PrØvene b l e i n k u b e r t ved 3 7 O ~ i 48 t i m e r . F o r bestem- melse av f e c a l c o l i f o r m e b a k t e r i e r b l e Eijkmans l a c t o s e b r o t h ( D i f c o 0017-01) be-
o
+
n y t t e t , o g prØvene b l e i n k u b e r t i vannbad ved 44.5 C -0.1 i 4 8 t i m e r . For v i d e r e d i a g n o s t i s e r i n g a v E s c h e r i c h i a c o l i e t t e r IMVC p r o s e d y r e n , b l e d e t b e n y t t e t medier o g r e a g e n s e r p r o d u s e r t a v Oxoid L i m i t e d (Oxoid manual).
3. F e c a l e s t r e p t o k o k k e r b l e b e s t e m t ved o v e r f l a t e u t s t r y k a v prØven p å Enterococcus a g a r (Difco nr.0746-OL), E t t e r i n k u b a s j o n ved 37 O C i 48 t b l e r o d - a k t i g e k o l o n i e r o m g i t t av e n smal h v i t sone r e g i s t r e r t som f e c a l e s t r e p t o k o k k e r
(N.M.K. n r . 68, 1 9 6 8 ) .
4. b l e forsØkt bestemt både ved o v e r f l a t e u t s a d og innstØping i C a l s i m - C a s e i n a t a g a r (Merck nr. 5 4 0 9 ) . Inkubasjon ved 20°C! P 72 t i m e r , Kolonier med en k l a r sone r m d t b l e r e g i s t r e r t som p r o t e o 1 y t i s k e . Ved u t y d e l i g e r e a k s j o n e r b l e s k å l e n e t i l s a t t 5 % e d d i k s y r e f o r a t den k l a r e sone r u n d t koloniene s k u l l e komme mer t y d e l i g frem (Levin 1 9 6 8 ) .
5. A n t a l l hamolytiske b a k t e r i e r b l e b e s t e m t ved o v e r f l a t e u t s t r y k på N u t r i e n t a g a r kcxoid CM 3 ) t i l s a t t 5 % kalveblod. T i l mediet b l e d e t t i l s a t t en b l a n d i n g a v 75 % s t e r i l t sjØvann l a g r e t mØrkt i 3 uker og med s a l t i n n h o l d på J %,
og 2 5 % s t e r i l t springvann ( Z o b e l l 1 9 4 6 ) . Inkubasjon ved 20°C i 72 t. Mobonier med k l a r l y s i s a v de r8de blodlegemer b l e r e g i s t r e r t .
6 . A n t a l l v i b r i o b a k t e r i e r b l e p å v i s t ved o v e r f l a t e utsæd p& TCBS medium Merck n r . 10263. Mediets s e l e k t i v e komponenter i s o l e r e r i hovedsak v i b r i o l i g n e n d e organismer (Kaneko and Colwell 1 9 7 3 ) . B a k t e r i e r fremvokst på d e t t e mediet o g som v a r gram n e g a t i v e b e v e g e l i g e s t a v e r , oxådse p o s i t i v e , f e r m e n t a t i v e i Bugh and
L e i f s o n s medium med glukose, s e n s i t i v e t o v i b r i o s t a t i c compound O/129 og novobiocin b l e r e g i s t r e r t som v i b r i o b a l c t e r i e r .
11. B a k t e r i o l o g i s k undersØkelse a v s jØvannet i oppdrettsmærene
l , T o t a l a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . m l b l e bestemt ved o v e r f l a t e u t - stryk p& N u t r i e n t ~ g a r ( ~ 1 x o i d CM)3 t i l s a t t en b l a n d i n g a v 75 % s t e r i l t sjØvann l a g - r e t m@rkt mer enn 3 Laker og 25 % s t e r i l t springvann, pH 7.2-7.4. V e d f o r t y n n i n g a v vannprovene b l e samme b l a n d i n g b e n y t t e t som fortynningsmedium. Inkubasjon 3 dØgn ved 37Oc og 5 dØgn ved 2 0 O ~ .
2 . For p å v i s n i n g a v c o l i f o r m e b a k t e r i e r , f e c a l e coliforme b a k t e r i e r med i d e n t i f i s e r i n g a v E s c h e r i c h i a c o l i b l e samme p r o s e d y r e b e n y t t e t som ved under- s a k e l s e r a v v å t f o r e t .
3. F e c a l e s t r e p t o k o k k e r b l e bestemt ved å f i l t r e r e 100 m l gjennom m i l l i p o r e f i l t e r med p o r e s t a r r e l s e på 0.45. F i l t r e n e i n o k u l e r t pa Enterococcus a g a r ( R i f c o n r . 0746-01)- Inkubasjon og a v l e s i n g b l e u t f Ø r t e t t e r samme metode som ved undersgkelsen a v v å t f o r .
4 , A n t a l l g r o t e o l y t i s k e b a k t e r i e r p r . m l sj@vann ble bestemt som f o r v å t f o r e t . Mediet b l e h e r t i l s a t t blandingen a v 75 % cj@vann, 25 % springvann som ved bestemmelse a v t o t a l a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . m l cj@van n ,
5 . A n t a l l hæmokytbske b a k t e r i e r bestemt ved o v e r f l a t e utsæd a v 0 - 1 m l sjØvann. Medium N u t r i e n t A g a r b x o i d CM 3 ) t i l s a t . t blandingen a v sjØvann og s p r i n g -
vann (75%-25%) ,
6 . S t i v e l s e s s p a l t e n d e b a k t e r i e r p r . m l sj4vkinn b l e bestemt på fØlgende medium: B e e f e x t r a e t 3 g , peptone 5 g r a g a r l 5 g , n a t r i u m - d e s o x i c h o l a t 3 g , brom- t h y m o l b l å t t 0.08 g , s t i v e l s e l 0 g r 75 % sjgvann og 25 % springvann a d 1000 m l pH 7 . 2 . Inkubasjon 48 t i m e r ved 20°C. S t i v e l s e s s p a l t e n d e b a k t e r i e r vokser p å d e t t e mediet med g u l e k o l o n i e r .
7. A n t a l l v i b r i o b a k t e r i e r p r . m 1 vann b l e bestemt på TCBS a g a r Werck n r . 10263) ved d i r e k t e u t s t r y k med 0 .l m l vann på p e t r i s k å l e r , v i d e r e f i l t r e r i n g gjennom m i l l i p o r e f i l t e r med p o r e s t Ø r r e l s e p å 0.45 mg a v l 0 m l o g LO0 ml s j a v a n n og i n o k u l e r i n g a v f i l t r e n e på TCBS a g a r . Inkubasjon ved 3 7 O ~ i 2 dØgn og 20°c i 3 dØgn. A n t a l l v i b r i o b a k t e r i e r p r . m l b l e b e r e g n e t ved undersØkelae a v fremvakate k o l o n i e r på mediet e t t e r samme prosedyre som f o r v å t f 6 r e t .
111, B a k t e r i o l o g i s k mdersClkelse a v f i s k e n i o p p d r e t t s a n l e g g e n e
Tilsammen 30 f i s k b l e undersØkt. O v e r f l a t e n og g j e l l e n e på h v e r f i s k b l e s t r Ø k e t med en s t e r i l p i n n e med bomull t v i n n e t i enden. PrØver f r a i n n h o l d e t i anusåpningen b l e t a t t u t med t i l s v a r e n d e u t s t y r , Pinnene b l e p l a s s e r t i Lauryl s u l p h a t e b r o t h og i n k u b e r t ved 3 7 O ~ i 48 t i m e r . Videre prosedyre f o r p å v i s n i n g av f e c a l e coliforme b a k t e r i e r med i d e n t i f i s e r i n g a v E s c h e r i c h i a c o l i b l e u t f Ø r t som f o r v å t f o r e t .
P. R e s u l t a t e n e f r a v å t f o r e t
Resul t a t e n e f o r den b a k t e r i o l o g i s k e undersØkel sen a v v å t f o r e t e r v i s t i Tab. 1 og 2 .
Tab. l v i s e r r e s u l f a t e n e f o r t o t a l a n t a l l levende b a k t e r i e r p r , gram av f o r e t g r u p p e r t i 4 grupper.
Tab. l . R e s u l t a t f o r t o t a l t a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . gram v å t f o r g r u p p e r t i 4 grupper
A n t a l l prØver A n t a l l p r a v e r i hver gruppe i h v e r gruppe
Gruppering Inkubasjon 2 0 O ~ Inkubas j on 37OC
Gruppe 1 : <1xl0 p r . gram 6 l l 13
Gruppe 2 : 1 x 1 0 ~
-
5x10 p r . gram 6 3 6 34Gruppe 3: 5 x 1 0 ~
-
1x10 p r . gram 7 8 9Gruppe 4: >1xl0 p r , gram 7 7 6
Ved inkubasjon -ved 2 0 " ~ b l e d e t p å v i s t e t a n t a l l bakterrter p r , gram
4 7
f r a 5x10 ti1 2x10
.
R e s u l t a t e n e f o r de f l e s t e prgiwne v a r mellom 1 x 1 0 ~ b a k t e r i e r p r . gram til 5 x 1 0 ~ b a k t e r i e r p r . gram. P a r a l l e l l dyrkning ved 37 O C ga l a v e r e r e - s u l t a t . den overveiende d e l mellom 50-70 % av a n t a l l e t ved ZOOC.T a b . 2 v i s e r r e s u l t a t e n e f o r colifornne b a k t e r i e r , f e c a l coliforme bak- t e r i e r med i d e n t i f i k a s j o n a v Escherichia c o l i og f e c a l e s t r e p t o k o k k e r .
Tab, 2 , Funn av coliforme b a k t e r i e r , f e c a l coliforme b a k t e r i e r , Escherichia c o l i og f e c a l e streptokokker i våtfEor a v f i s k , R e s u l t a t e n e e r g r u p p e r t i 4 grupper
Coliforme Fecal c o l i - E s c h e r i c h i a Fecabe b a k t e r i e r forme b a k t e r i e r c o l i s t r e p t o k o k k e r A n t a l l prØver A n t a l l pr8ver A n t a l l prgiver A n t a l l p r @ v e r Gruppe 1: < l 0 2
20 4 5 5 l 18
~- .
2 3
Gruppe 2 : 10 -10 2 2 l 7 11 2 5
3 4
Gruppe 3 : 10 -10 1 2 l l 11
R e s u l t a t e n e e r g r u p p e r t i 4 grupper. A n t a l l e t coliforme b a k t e r i e r
4 2
v a r i e r t e f r a O til 5x10 p r . gram f o r , Eecal coliforme b l e p å v i s t o p p t i l 9x10 p r . gram. I 11 a v 62 prØver b l e Escherichia c o l i p å v i s t , Fecale streptokokker i s a m e m a t e r i a l e v a r i e r t e mellom O til 2x10 p r . gram f o r . 4
Disse w d e r s @ k e l s e r v i s e r s t o r e v a r i a s j o n e r i d e t b a k t e r i o l o g i s k e r e - s u l t a t , V å t f 6 r e t b e s t å r i hovedsak a v småsei, lodde, r e k e a v f a l l og avskjær e l l e r a v f a l l f r a f i s k e f i l e t produksjonen. Ved h v e r t anlegg b l i r r å s t o f f e t b l a n d e t og oppnialt, Behandlingen, t r a n s p o r t e n og l a g r i n g e n a v r å s t o f f a v denne a r t vi1 v a r i - e r e og i n n v i r k e på den b a k t e r i o l o g i s k e k v a l i t e t a v f o r e t . Videre v i l også r e n h a l - d e t a v d e t maskinelle u t s t y r under opparbeiding a v f o r e t ha v e s e n t l i g betydning f o r den b a k t e r i o l o g i s k e k v a l i t e t , De hØyeste r e s u l t a t e r b l e £unnet d e r hvor av- f a l l e l l e r avskjær inngikk som en v e s e n t l i g d e l a v f o r e t . I de t i l f e l l e r hvor r å s t o f f e t b e s t o a v h e l i n n f r o s s e t f i s k kunne r e s u l t a t e n e være svært l a v e uten på- v i s n i n g av coliforme b a k t e r i e r e l l e r f e c a l e s t r e p t o k o k k e r . Ved pr8vetakingen b l e de.t i k k e o b s e r v e r t t i l f e l l e r hvor f i s k e n v r a k e t f o r e t .
Det f i n n e s f å d a t a f o r b a k t e r i o l o g i s k e undersGkelser a v animalsk f 6 r - s t o f f , UndersØkelser av ukonservert minkfor hvor r å s t o f f e t med unntak a v b l p r o - dukt f r a s l a k t e r i i n d u s t r i e n kan sammenlignes med våtfcir til f i s k , b l e d e t p å v i s t l a n g t bØyere r e s u l t a t f o r coliforme b a k t e r i e r . ( ~ o f t s g å r d og Yndestad l 9 7 0 ) , Bette kan s a n n s y n l i g t i l s k r i v e s s l a k t e r i a v f a L l e t hvor denne type b a k t e r i e r e r mer v a n l i g . For t o t a l a n t a l l b a k t e r i e r p r , gram e r r e s u l t a t e n e i samme s t @ r r e l s e s o r d e n . Under-
sØkelser a v tØrkekonservert f i s k e f o r v i s t e også v a n l i g forekomst a v b a k t e r i e r til- hØrende f a d b i e n E n t e r o b a c t e r i a c e a e o g v i d e r e f e c a l e s t r e p t o k o k k e r ( T r u s t 1971)
.
Andre a k t u e l l e b a k t e r i e r i en s l i k u n d e r s a k e l s e e r Salmonella
-
og G l o c t r i d j m M t u - linum. Salmonella b l e u t e l u k k e t e t t e r preliminære forsfak hvor i n n h o l d e t a v i n d i k a - t o r b a k t e r i e r v a r i en s l i k s t 4 r r e l s e s o r d e n a t s a n n s p l i g h e t e n f o r p å v i s n i n g a v Salmonella v a r s v æ r t l i t e n , For C l o s t r i d i u m botulinum r å r l a b r a w r i e t f o r e l f a p i g i k k e o v e r u t s t y r til p å v i s n i n g . C l o s t r i d i u m botulinum h a r i m i d l e r t i d vært p å v i s t r e l a t i v t o f t e i oppd9ettsanlegg i Danmark og S t o r b r i t a n n i a hvor d e t a n t a s a t bakte- r i e n e e r i n n f Ø r t i anleggene v i a f o r e t som hovedsak b e s t å r a v i n d u s t r i f i s k (Cann e t a l . 1975, Buss e t a l . 1974).
også i Norge e r d e t p å v i s t C l o s t r i d i u m botulinum b f o r b i n d e l s e med opp- d r e t t s f i s k , Aoe som gjØr a t d e t e r grunn f o r å u t v i s e f o r s i k t i g h e t n å r d e t g j e l d e r produksjon a v l e t t k o n s e r v e r t e p r o d u k t e r f r a denne r å v a r e ( T j a b e r g o g B å s t e i n 1975).
s å d e p r o t e o l y t i s k e o g s t i v e l s e s s p a l t e n d e b a k t e r i e r b l e p å v i s t i v å t - f o r e t . Ved o v e r f l a t e u t s t r y k b l e d e t i m i d l e r t i d l e t t sammenklumping a v k o l o n i e r , noe som medffarte v a n s k e l i g h e t e r med s i k k e r r e g i s t r e r i n g av d i s s e grupper,
Hæmolytiske b a k t e r i e r b l e p å v i s t i l a v t a n t a l l . D e t t e v a r også til- f e l l e f o r v i b r i o b a k t e r i e r ved d i r e k t e u t s t r y k på TCBS a g a r Merck n r . 10263. 1 de t i l f e l l e r hvor d e t b l e r e g i s t r e r t v e k s t a v k o l o n i e r b l e d e t t e f u n n e t 5 v a r e gram p o s i t i v e kokker. UndersØkelser a v d i s s e b a k t e r i e g r u p p e r i v å t f o r e t ga s å l e d e s sparsom informasjon.
11. R e s u l t a t e n e f r a sjØvannprØvene
R e s u l t a t e n e f o r den b a k t e r i o l o g i s k e undersØkebsen a v sjØvannet i opp- d r e t t s a n l e g g e n e b a s e r e r s e g på månedlige o b s e r v a s j o n e r . Fig. l v i s e r t o t a l t a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . m l sjØvann L oppdrettsmærene ved inkubasjon ved 2o0C som b l e
2 4
f u n n e t å v a r i e r e mellom 2x20 p r , m l til 1x10 p r . m l .
Fig. b , T o t a l t a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . m l sjØvann i o p p d r e t t s a n l e g g e n e (A, B , C ) , u f o r u r e n s e t f j o r d ( D ) og f o r u r e n s e t f j o r d ( E ) ,
l o 4
T o t a l t a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . m l l 0 3
Temperatur jan f e b rna a g r mai jun j u l aug s e p o k t nov d e s
Det b l e p å v i s t b i t e n f o r s k j e l l mellom de t r e o p p d r e t t s a n l e g g e n e . Re- s u l t a t e n e l i g g e r i n n e n f o r d e t s k r a v e r t f e l t e t ( A , B, C ) . Be hØyeste v e r d i e r r e p r e - s e n t e r e r s p o r a d i s k e funn, Ikke i noen a v anleggene b l e d e t p g v i s t t y d e l i g a r s v a r i - a s j o n . R e s u l t a t e t f o r t o t a l a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . m l sj8vann ved inkubasjon ved 37 o C v i s t e v e s e n t l i g l a v e r e r e s u l t a t i a l l e p r 4 v e r .
I prØvene f r a området D ( u f o r u r e n s e t sjØvann) b l e d e t p å v i s t r e s u l t a t e r i samme s t Ø r r e l s e s o r d e n med t o t a l a n t a l l levende b a k t e r i e r p r . m l mellom 4x10 2 til 1x10 3
.
I den f o r u r e n s e d e f j o r d e n som inngikk i EorsØket (E) b e s t o d e t o r g a n i s - ke a v f a l l i hovedsak a v kloakk f r a b o l i g e r o g t i l s i g f r a jordbruksamråider. Som mål f o r b a k t e r i e l l k v a l i t e t b l e i f Ø r s t e rekke b e n y t t e t forekomst a v a n t a l l i n d i k a t o r - organismer s b m c o l i f o r m e b a k t e r i e r , f e c a l c o l i f o r m e , E s c h e r i c h i a c o l i og f e c a l e s t r e p t o k o k k e r . Den o r g a n i s k e t i l f Ø r s e l kan i m i d l e r t i d i k k e d i r e k t e sammenlignes med d e t en f i n n e r i o p p d r e t t s a n l e g g . R e s u l t a t e n e f o r t o t a l a n t a l l levende bakte- r i e r e r v e s e n t l i g hØyemie enn d e t som b l e p å v i s t i o p p d r e t t s a n l e g g e n e med a n t a l l mellom 3 x 1 0 ~ til 3x10 4
.
S p e s i e l t prmvene f r a desember til mars v i s t e hØye v e r d i e r .T a b e l l 3-4-5 v i s e r r e s u l t a t e n e f o r forekomst a v i n d i k a t o r b a k t e r i e r f r a sj@vannsprØvene.
Tab, 3 , Antaal c o l i f o r m e b a k t e r i e r p r . 100 m l sjØvann p å v i s t i oppdrettcanleggene ( A , B , C ) , u f o r u r e n s e t f j o r d ( D ) o g f o r u r e n s e t f j o r d ( E )
A B
c
D ESeptember 120 64 3 9 O 1100
Oktober 7 5 0 2 3 O l 5 0
November 20 O 7 5 O 150
Desember O l 5 1100 O 210
J a n u a r 0 28 460 O 460
F e b r u a r 4 3 64 460 O 120
Mars 39 O 4 3 O 240
Apri.1 6 4 3 9 O O 150
Mai 75 75 O O 210
J u n i 9 3 28 240 O l 5 0
J u l i 240 r l 0 0 210 7 5500
A u p s t 460 240 460 3 4600
Tab, 4. = t a l l f e c a l co1 if o m e b a k t e r i e r p r , 100 m l sj8vann p a v i s t i o p p d r e t t s - anleggene ( A , B, C)
,
u f o r u r e n s e t f j o r d ( D ) o g f o r u r e n s e t f j o r d (E)A B
e
D ESeptembe r 20 4 E l O 460
Oktober 2 3 O 7 O 7 5
November 9 O l l O 6 4
Desember O O 4 3 O 120
J a n u a r O O 43 O 120
Februar 7 l1 4 3 O 1 5
Mars 7 O O O 11
A p r i l O 14 O O O
Mai 2 1 3 9 O O l l
J u n i l l 1 5 3 9 O 4 3
J u l i 4 3 4 3 14 3 1100
Tab. 5 . Antabl f e c a l e s t r e p t o k o k k e r p r . 100 m l sjØvann p å v i s t i o p p d s e t t c a n - leggene ( A , B , C ) , u f o r u r e n s e t f j o r d ( D ) og f o r u r e n s e t f j o r d ( E )
September 7 2 10 O 210
Oktober 9 4 O O 8 0
November 1 3 2 10 O 3 4
Desember 2 O 14 O 87
J a n u a r 4 4 11 O 8 7
Februar O 0 O O 33
Mars O O 4 O 15
A p r i l l 4 2 l l O 30
Mai O L 5 3 O 50
J u n i 14 1 3 7 O 1 O
J u l i 1 5 15 14 3 900
August 15 8 12 2 700
I d e t uforurensede området b l e d e t i k k e p å v i s t i n d i k a t o r b a k t e r i e r , b o r t s e t t f r a spordadiske funn a v c o l i f o r m e b a k t e r i e r i j u l i / a u g u s t . 1 o p g d r e t t s - anleggene derimot b l e i n d i k a t o r b a k t e r i e r p å v i s t i en s t o r d e l a v prØvene, A n t a l l e t p r . m l v a r i m i d l e r t i d l a v t . For c o l i f o r m e b a k t e r i e r b l e d e t p å v i s t 1 . 1 ~ 1 0 p r . 3 100 m l son s t Ø r s t e a n t a l l , av fecab c o l i f o r m e b l e d e t p å v i s t o p p t i l 43 p r . 100 m l og E s c h e r i c h i a c o l i b l e p å v i s t i s m e s t Ø r r e l s e s o r d e n . HØyeste v e r d i f o r f e c a l e s t r e p t o k o k k e r b i e f u n n e t å være 15 p r . 100 m l (Tab, 3-4-5)
.
R e s u l t a t e n e f o r opp- d r e t t s a n l e g g e n e v a r l a n g t l a v e r e enn f r a den f o r u r e n s e d e f j o r d e n ( E ) hvor gruppene a v de undersØkte i n d i k a t o r b a k t e r i e r b l e p å v i s t i den overveiende d e l a v prØve- m a t e r i a l e t ,Samlet v i s e r undercØkelsen a t i n d i k a t o r b a k t e r i e r som coliforme bakte- r i e r , fecab c o b i f o r n e b a k t e r i e r , E s c h e r i c h i a c o l i og f e c a l e s t r e p t o k o k k e r e r van- l i g forekommende i f o r b i n d e l s e med o p p d r e t t s a n l e g g f o r f i s k i sjØvann. I m i d l e r t i d v a r a n t a l l e t av d i s s e grupper b a k t e r i e r p r . m l l a v t , Det e r s a n n s y n l i g a t t i l f o r - s e l e n a v d i s s e b a k t e r i e g r u p p e r til vannet s k j e r gjennom f 0 r e t som b e n y t t e s , da be- t y d e l i g mengder i n d i k a t o r b a J e t e r i e s p r , gram b l e p å v i s t i en d e l a v f 0 r p r ~ v e n e ~
111, R e s u l t a t e n e a v undersGkelsen f r a f i s k e n i o p p d r e t t s a n l e g g e n e
B a t e r i o l o g i s k u n d e r s a k e l s e f r a o v e r f l a t e , g j e l l e r og t a m i n n h o l d h a s o p p d r e t t s f i s k v i s t e a t L 8 a v 30 f i s k b l e E s c h e r i c h i a c o l i p a v i s t på o v e r f l a t e n og g j e l l e r , og i $ l a v 30 f i s k i s a m e m a t e r i a l e b l e t i l s v a r e n d e grupper p å v i s t i t a m - i n n h o l d e t . Ved t i l s v a r e n d e kanadiske u n d e r s a k e l s e r a v gyrtevandrende Laks i s a l t v a n n og ferskvann b l e d e t også p å v i s t c o l i f o r m e b a k t e r i e r , men med l a v forekomst a v
f e c a l c o l i f o r m e . E s c h e r i c h i a c o l l b l e i k k e p å v i s t ( S t r a c d i n e and Dubeta, 1 9 7 4 ) . Coliforme b a k t e r i e r , f e c a l c o l i f o r m e b a k t e r i e r og f e c a l e s t r e p t o k o k k e r e r i k k e u v a n l i g å p å v i s e i matvarer f r a f i s k og k j Ø t t . Mos f i s k e t f a n g e t L u f o r - u r e n s e t farvann forekommer i m i d l e r t i d i k k e d i s s e b a k t e r i e g r u p p e r ,
sa
p å v i s n i n g a v d i s s e grupper i f e r d i g e matvarer s k y l d e s v a n l i g v i s de h y g i e n i s k e f o r h o l d under spp- a r b e i d e l s e n . D e t t e h a r medfØrt u t a r b e i d e l s e a v f o r s l a g til b a k t e r i o l o g i s k s t m d a r d f o r f i s k e v a r e r som s p e s i e l t i i n t e r n a s j o n a l handel v i l komme til anvendelse. (The I n t e r n a t i o n a l Comrnission on M i c r a b i o l o g i c a l S p e c i f i c a t i o n f o r Foods 1 9 7 4 ) . Opp- d r e t t s f i s k kan s å l e d e s a l l e r e d e på r å v a r e s t a d i e t ha f å t t t i l f Ø r t i n d i k a t o r b a k t e r i - e r , mens f i s k f a n g e t i åpent hav f 8 r s t v i l kunne t i l f Ø r e s d i s s e b a k t e r i e g r u p p e r under b e a r b e i d i n g . D e t t e t i l s i e r s t r e n g e h y g i e n i s k e f o r h o l d s r e g l e r under oppar- b e i d i n g og f o r e d l i n g a v o p p d r e t t s f i s k ,P r o t e o l y t i s k e b a k t e r i e r b l e p å v i s t i a l l e sjØvannsprØvene som b l e under- sØkt. Ved o v e r f l a t e u t s t r y k b l e d e t i m i d l e r t i d l e t t sammenklumping a v k o l o n i e r , noe som medfØrte v a n s k e l i g h e t e r med s i k k e r r e g i s t r e r i n g a v a n t a l l p r o t e o l y t i s k e b a k t e r i e r p r , m l .
Forekomsten a v s t i v e l s e s s p a l t e n d e b a k t e r i e r b l e e t t e r den beskrevne metode r e g i s t r e r t i l a v e a n t a l l ved puØvetakingsstedene A , B , C og D. Ved prØve- t a k i n g s s t e d E ( f o r u r e n s e t f j o r d 1 b l e d e t p å v i s t hØye v e r d i e r i tidsrommet f r a desember til mars.
Fig. 2, S t i v e l s e s s p a l t e n d e b a k t e r i e r p r , m l cjGvann i oppdrettsanleggene (A, B , 61, u f o m r e n s e t f j o r d ( B ) og f o r u r e n s e t f j o r d ( E )
l
ABCmuag
T o t a l t
a n t a l l
I
s t i v e l s e s
-
s p a 1 tende b a k t e r i e r LO
D r . m l
Temperatur jan f e b rna- a p r mal jun j u l aug sep o k t nov de6
Forekomsten av htemolfiiske b a k t e r i e r v a r v a r i e r e n d e i a l b e o p f l r e t t s - anleggene med r e s e a l t a t f r a 20 p r , m 1 til 400 p r , m l , T i l s v a r e n d e r e s u l t a t b l e på- v i s t f r a d e t uforurensede omradet. F r a den forurensede f j o r d e n (E) v a r r e s u l t a t e n e f r a desember til mai h@yere, mens r e s u l t a t e n e f o r r e s t e n a v å r e t f a l t i n n e n f o r r e s u l t a t e n e f r a oppdrettsanleggene ( F i g , 3 ) ,
Fig. 3. Nærnobytiske b a k t e r i e r p r , m l p å v i s t i o p p d r e t t s a n l e g g e n e (A, B, C ) , u f o r - u r e n s e t f j o r d (D) og fortarenset f j o r d ( E )
10 A n t a l l hærnolytiske b a k t e r i e r p r , ml.
l o Z
Tempe r a t u r jan f e b mar a p r mai jun j u l aug s e g o k t nov d e s
2- 2 - 4- 4- 7.5- 14- 15- 17- 13; 8; 6- 3-
4 .5Oc 5Oc 5Oc 8*c 1 2 ,5Oc 17Oc L ~ O C 18OC 9.5 C 9
e
5,5Oc 4 ,5°C A n t a l l v i b r i o b å k t e r i e r p r . m l sjØvann e r v i s t i f i g . 4 ,Fig. 4 , A n t a l l v i b r i o b a k t e r i e r p r , m l vann i o p p d r e t t s a n l e g g e n e (A, B, C ) , u f o r - u r e n s e t f j o r d ( D ) o g f o r u r e n s e t f j o r d (E)
ABC
A n t a l l v i b r i o b a k t e r i e r
p r . ml l 0 2
Temperatur jan f e b mar a p r mai jun j u l aug s e p o k t nov d e s
Fra den forurensede f j o r d e n ( E ) b l e d e t r e g i s t r e r t v e k s t ved d i r e k t e u t s t r y k av O , % m l på p e t r i s k å l e r med TCBS a g a r Merck n r . 10263. ResuLtatene f r a E l i g g e r j e v n t over hØyere enn f r a oppdrettsanleggene (A, B , C ) og d e t uforurensede p r Ø v e t a k i n g s s t e d e t ( D ) ,
Fysiske parameter: S a l i n i t e t e n i o p p d r e t t s a n l e g g e n e v a r i e r t e fra 1 . 5 % ti1 2 , 8 %. Laveste temperatur b l e r e g i s t r e r t i januar på 2OC o g h@yeste i j u l i på
L ~ ~ C . T i l s v a r e n d e f y s i s k e v a r i a s joner b l e også p å v i s t i de Øvrige p r @ w t & i n g c s t e d , Ned unntak a v f r e k v e n t p a v i s n i n g a v i n d i k a t o r b a k t e r i e r i o p p d r e t t s a n l e g - gene v i s e r r e s u l t a t e n e f o r den b a k t e r i o l o g i s k e undersØkelsen l i t e n f o r s k j e l l mellom oppdrettsanleggene ( A , B , C) innbyrdes og v i d e r e sammenlignet med sjØvmn u t e n u t - s l i p p f r a k j e n t e o r g a n i s k e f o r u r e n s i n g c k i l d e r ( D ) . I r e s u l t a t e n e som bygger på månedlige undersØkelser, b l e d e t i k k e r e g i s t r e r t noen t y d e l i g S r s v a r i a s j o n ,
E n k e l t e r e s u l t a t som s k i l l e r s e g u t , kan s a n n s p l i g t i l s k r i v e s f y s i s k e f o r a n d r i n g e r som k r a f t i g v i n d e l l e r
strm
med o p p v i r v l i n g av bunnsediment. F r a en b & t e r l o % o ~ i c k v u r d e r i n g e r d e t ingen d a t a som t y d e r p å Økt o r g a n i s k b e l a s t n i n g i sj$vannet i opp- d r e t t s a n l e g g og d e m e d @ k e t b & t e r i e v e k s t ,Det e r s a n n s y n l i g a t a v f a l l e t som o p p s t å r ved f 6 r s Ø l og f i s k e a v f a r i n g i k k e b r y t e s ned i f i s k e n s omgivelse, men f a r e s u t f r a o p p d r e t t s m r e n e ,
L i t t a r a t u r h e n v i s n i n g e r
AOAC. A s s o c i a t i o n o f O f f i c i a l W a l y t i c a l Chemists 1970.
Cann, D . c . ~ T a y o l o r r L.Y. and Hobbs, G , 19755: The i n c i d e n c e of G l o s t r i d i u m botuiinum i n farmed t r o u t r a i s e d i n G r e a t B r i t a i n . J. Appl. B a e t , 39: 331-336, Claudon, D.G., Thoøpson, D.1,, C h r i s t e n s o n , E.M., Lawton, G,W, m d Dick, E.C, 1971: Prolonged S a l m o n e l l a c o n t a m i n a t i o n o f a r e c r e a t i o n l a k e by r u n o f f watews, Appl. M i c r o b i o l . 21: 875-877,
Ewing, W.H., Tatum, N.W. and B a v i s , B.R. 1957: The o c c u r r e n c e o f E c c h e r i c h i a e o l i s e r o t y p e c a s s o c i a t e d w i t h d i a r r h o e a l d i s e a s e i n t h e United S t a t e s . P u b l i c H e a l t h Lab. 95: 1 1 8 ,
G e l d r e i c b , E.E. and C l a r k e , N.W. 1966: B a c t e r i a l p o l l u t i o n i n d i c a t o r s i n t h e i n t e s t i n a l t r a c t o f f r e s h w a t e r f i s h . Appl. M i c r o b i o l . 14: 429-437.
Gilmour, A . , A l l a n , M.C. and McCalLm, M,F. 1975: E n m e r a t i o n o f h e t e r o t r o p h i c b a c t e r i a i n w a t e r from t a n k s i n v o l v e d i n a f i s h f e e d i n g t r i a l , J . Appl, B a c t , 38:
201-203.
Hansen, I.C. og Bonde, G - E . 19733: Aeromnac h y d r o p h i l a ( S . l i q u e f a c i e n s ) som m u l i g å r s a g til f u r u n k u l o s e hos å l . Nordisk vet-med. 25 : 121-130.
Huss, M.H., P e d e r s e n , A , and Cann, D.C. 1974: The i n c i d e n c e o f C l o s t r i d u m botulinum i n Danish t r o u t f a m s , I. D i s t r i b u t i o n i n f i s h and t h e i r environment.
J. Fd. Technol. 9: 455,
J a n s s e n , W.A. and Meyers, D . @ , 1968: F i s h : s e r o l o g i c e v i d e n c e o £ i n f e c t i o n wbth human p a t h o g e n s , S c i e n c e 159: 547-548,
Kaneko, T , and ColwelL, R,R, 1973: Ecology o f V i b r i o p a r a h a e m o l y t i c u s i n Chesapeake Bay, J, B a c t e r i o E . 113: 24-32.
Levin, R.E, 1968: D e t e c t i o n and i n c i d e n c e o f s p e c i f i c s p e c i e s of s p o i l a g e b a c t e r i a of f i s h . Appl, KicrobioL, 16: 1734-1737.
~ o f t s g å r d , G, og Yndestad, M. 1990: M i k r o b i o l o g i s k e u n d e r c @ k e l s e r a v f e r d i g f o r f o r mink. Nordisk vet-med, 22: 595-598,
Nordisk Metodikk-komite (Nm.1 f o r l e v n e d s m i d l e r NMK n r . 6 8 , 1968.
Oxoid Manual, Qxoid Ltd. London 1965.
m e i n h e i m e r , G, 1974: Aquatic t a c r o b i o l o w . E n g l i s h e d i t i o n by John Wiley and Sons Ltd. London, New York, S N n e y , Toronto.
Simudo, U . and Kaneko, E. 1973: A numerical taxonomy o f V i b r i o and Aeromonac from normal and d i s e a s e d marine f i s h . B u l l e t i n o f t h e Japanese S o c i e t y o f S c i e n t i f i c F i s h e r i e s . 39: 689-703.
Thatcher, F.S. and C l a r k , D.S, 1968: Mlcroorganisms i n Foods: T h e i r s i g n i f i c a n c e and methods o f e n m e r a t i o n . U n i v e r s i t y o f Toronto P r e s s .
The I n t e r n a t i o n a l Commission on MhcrohiologicaE S p e c i f i c a C i o n fox.Foods (ICMSF) 1974: Microorganisms i n Foods, volume 11. Sampling f o r m i c r o b i o l o g i c a l a n a l y s i s : P r i n c i p l e s a h s p e e i f i c a p p l i c a t i o n , U n i v e r s i t y o f Toronto P r e s s .
Tjaberg, T.B. og ast tein, T. 1975: Utbredelse a v C l o c t r i d i u m botulinum i norske f i s k e o p p d r e t t s a n l e g g . Norsk Veterinær T i d s s k r i f t n r . 11: 718-720.
T r o a s t , X,L. 1975: M t i b o d i e s a g a i n s t e n t e r i c b a c t e r i a i n brown b u l l h e a d c a t f i s h ( I c t a l u r u s nebulosus, Le Sueur) i n h a b i t i n g contaminated w a t e r s . Appl. M i c r i b i o l . 30: 189-192.
T r u s t , T,I. 1971: B a c t e r i a l c o u n t s of commercial f i s h d i e t s . J . F i s h . Res. Bd.
Canada 2 8 : 1185-1189,
Shewan, S.M. 1962.: The microbiology o f s e a w a t e r f i s k , F i s h a s Food volume 1.
Academic P r e s s , New York and London: 487.
S t r a s d i n e , G.A. and Dubetz, L. 1974: Coliform f l o r a o f m i g r a t i n g sockey salmon.
J. F i s h . Res, Board Canada 31: 1559-1560.
ZobeiL, C.E, 1941: The occurrence o f c o l i f o r m e b a c t e r i a i n oceanic water.
J, B a c t e r i o l . 42: 284,
Z o b e l l , C.E. 1946: Marine MicrobioLogy. Chrom. Bot, Waltham. Ma.ss.
