Andre tiltak

4.3.1 Material e reagentes

Os tecidos vegetais utilizados foram os seguintes: pimento vermelho, cenoura, polpa de tomate e pimentão seco moído, foram adquiridos no supermercado. A seringa de 20mL foi comprada na farmácia, a fécula de batata usada como adsorvente e o sal de cozinha foram adquiridos no supermercado. Os solventes usados foram éter de petróleo

40-60º, acetona, etanol. O papel de cromatografia utilizado foi da marca Whatman. Para as soluções preparadas em meio aquoso, foi sempre usada água destilada.

4.3.2 Maceração dos alimentos na mistura acetona /éter de petróleo1:1

Num almofariz colocou-se separadamente o pimento vermelho, a cenoura raspada e polpa de tomate, cortados aos bocados e triturou-se. Juntou-se a mistura acetona / éter de petróleo 1:1 e deixou-se macerar. De seguida filtrou-se com a ajuda de papel de filtro e funil para um funil de separação. Acrescentou-se a mistura acetona / éter de petróleo 1:1 e solução saturada de água com sal, agitou-se e quando as fases se separaram, desprezou-se a fase aquosa (inferior) e à fase orgânica juntou-se água. Agitou-se e desprezou-se novamente a fase aquosa, à fase orgânica juntou-se sal de cozinha e reservou-se.

4.3.3 Maceração dos alimentos antecedida de desidratação em etanol a 99%

Triturou-se e macerou-se a cenoura raspada em etanol a 99%. De seguida efetuou-se uma filtração com funil e papel de filtro. O filtrado foi desprezado e o resíduo voltou novamente ao almofariz e macerou-se novamente com etanol. Filtrou-se de novo e o resíduo voltou para o almofariz e macerou-se com a mistura acetona / éter de petróleo 1:1. Filtrou-se com a ajuda de papel de filtro para um funil de separação, acrescentou-se éter de petróleo e solução saturada de água com sal de cozinha. Agitou- se, desprezou-se a fase aquosa e à fase orgânica acrescentou-se uma espátula de sal de cozinha e reservou-se.

O pimento vermelho foi triturado e macerado em etanol a 99%. Seguidamente filtrou-se com a ajuda de papel de filtro e funil, para um copo. O resíduo voltou ao almofariz e macerou-se novamente em etanol. Filtrou-se de novo, rejeitou-se o filtrado e o resíduo foi macerado com a mistura acetona / éter de petróleo 1:1. Filtrou-se para um funil de separação e o resíduo voltou ao almofariz onde foi macerado éter de petróleo.

Realizou-se nova filtração para o funil de separação combinando os filtrados e juntou-se solução saturada de água com sal de cozinha. Agitou-se, desprezou-se a fase aquosa, e à fase orgânica isolada acrescentou-se uma espátula de sal de cozinha e reservou-se.

4.3.4 Cromatografia em papel dos carotenoides

Prepararam-se várias câmaras de cromatografia com eluentes diferentes. Assim, para goblés com capacidade de 250mL adicionou-se separadamente 10mL dos seguintes eluentes mistura acetona / éter de petróleo 10:90, etanol a 99% e mistura acetona / etanol 1:1. O papel de cromatografia utilizado foi da marca Whatman. As amostras foram aplicadas com um capilar a cerca de 1,5cm das extremidades do papel com aproximadamente 5cm de largura por 10cm de altura. No mesmo papel fez-se duas aplicações, a amostra de extrato obtido por maceração direta na mistura acetona / éter de petróleo 1:1 e o extrato submetido a desidratação prévia em etanol a 99% das três fontes: cenoura, polpa de tomate e pimento vermelho. Colocou-se um papel de cromatografia com as amostras de cenoura num goblé com etanol a 99%, outro num goblé com a mistura acetona / etanol 1:1 e outro numa mistura acetona / éter de petróleo 10:90, em ambos os casos obteve-se uma mancha amarela facilmente arrastada em todos os solventes. Quanto ao pimento vermelho utilizou-se os mesmos eluentes da cenoura e ainda a mistura acetona / éter de petróleo 10:90, mas só a última mistura permitiu a separação dos componentes das amostras (nos outros eluentes os componentes sofreram arrastamento comparável e as manchas ficaram sobrepostas próximas da frente dos solventes). Em relação à polpa de tomate os eluentes utilizados foram os mesmos da cenoura; com a mistura acetona / éter de petróleo 10:90 os componentes apresentaram arrastamento semelhante na frente dos solventes e as manchas ficaram praticamente sobrepostas, mas em etanol e na mistura acetona / etanol 1:1 obteve-se uma mancha amarela atribuída ao caroteno próxima da frente do solvente e uma mancha vermelha (atribuída ao licopeno) ficou retida junto do ponto de aplicação. Adicionalmente, testou-se o éter de petróleo puro mas os resultados foram comparáveis aos obtidos com a mistura acetona / éter de petróleo 10:90 Ainda se realizou um estudo comparativo entre o pimento vermelho e o pimentão seco moído.

Num papel de cromatografia aplicou-se a amostra de pimento vermelho preparado por desidratação prévia em etanol e a amostra de pimentão seco moído macerado na mistura acetona / éter de petróleo 1:1, o eluente escolhido foi a mistura acetona / éter de petróleo 10:90. Mergulhou-se os papeis até cerca de 0,3-0,5cm da extremidade próxima da amostra. Os sistemas foram tapados com um vidro de relógio até a fase móvel percorrer cerca de 8cm do papel. As manchas apresentaram uma separação razoável, evidenciando-se difrenças nos dois cromatogramas.

4.3.5 Separação dos pigmentos da polpa de tomate por cromatografia em coluna

Efetuou-se o empacotamento de uma seringa de 20 mL com fécula de batata como descrito no ponto 4.2.1.2 deste capítulo e acrescentou-se a amostra (fase orgânica preparada no ponto 4.3.2), à qual se adicionou um pouco de fécula de batata e deixou-se evaporar o solvente para preparar um extrato sólido . Seguiu-se a eluição com o éter de petróleo para separar os pigmentos do tomate, primeiro saiu a fração amarela seguida de uma laranja.